[發明專利]一種刀鱭耳石微化學分析前處理的方法

有效

• 申請號: 201510605215.0
• 申請日: 2015-09-21
• 公開（公告）號: CN105136541B
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 姜濤;劉洪波;楊健
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙)32104
• 代理人: 殷紅梅,涂三民

技術領域

本發明涉及一種刀鱭耳石微化學分析前處理的方法，本發明屬于生物監測環境技術領域。

背景技術

刀鱭（Coilia nasus）作為“長江三鮮”之一，一直以來都是重要的漁獲物。但是近年來，由于受到酷漁濫捕、生境破壞、洄游通道阻隔等影響，其汛期產量已大幅度銳減，群體小型化、低齡化問題嚴重。然而，作為一種洄游型魚類，刀鱭淡水產卵孵化、海水育肥成長的復雜生活史特征使得對其洄游生態學中的環境履歷特征、洄游模式、群體起源和關聯性等問題遲遲得不到有效地解決。進而為其資源保護、合理評估、人工繁育、增殖等工作帶來困難。所幸的是，近年來隨著耳石微化學研究的發展，魚類耳石上的微化學信息已經被廣泛證明適用于解決洄游型魚類生態學上的諸多難題。

魚類耳石是其內耳半規管中的硬組織，共有三對，分別為矢耳石、星耳石和微耳石。其中矢耳石作為體積最大的耳石常被用于各種耳石研究。由于耳石在魚體內隨著魚的生長圍繞耳石核心不斷包裹積累，其上每一層積累的元素信息與魚所棲息的環境息息相關。基于這樣的情況，耳石在經過制成耳石核心暴露的薄片后，進而分析耳石徑（自耳石核心至耳石邊緣）上的微化學信息，可了解該魚整個生活史過程中的環境履歷情況。在耳石微化學分析中，常用的分析設備有電子探針微區分析儀（EPMA）、激光燒蝕電感耦合等離子質譜儀（LA-ICPMS）、穩定同位素分析儀（IRMS）等一系列應用于金屬、礦物等領域的大型、高新、精密儀器。然而，由于以上這些分析儀器原來所涉及的樣品多為金屬、礦物等而并非魚類耳石，這使得一些原有的樣品前處理方法并不適用于魚類耳石這種生物組織的微化學分析。于此同時，魚類學中以往用于微結構研究的處理方法也并不符合以上這些分析儀器的分析要求（如樣品需要拋光、鑲嵌物需要較高的硬度和一定的耐熱性等）。因此，盡快解決魚類耳石微化學分析中，耳石樣品前處理的技術難題，對于開展魚類耳石微化學研究，進而深入魚類生態學研究工作具有十分重要的意義。本發明所涉及的刀鱭耳石微化學分析前處理的方法，結合傳統魚類學耳石微結構研究和微化學分析的需要，優化相應的樣品處理方法，同時滿足不同的研究需要。并且為其他魚類耳石微化學分析提供借鑒，也為利用耳石微化學技術在我國漁業科技方面做出突破性進展提供技術支持。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術中存在的不足，提供一種可以更好地結合耳石輪紋分析和微化學分析結果對魚類生態學相關問題進行研究和解析并能夠同時滿足于多種研究需要的一種刀鱭耳石微化學分析前處理的方法。

按照本發明提供的技術方案，所述一種刀鱭耳石微化學分析前的處理方法包括以下步驟：

a、耳石在經過摘取后，首先使用去離子水清洗以除去粘液和包膜，然后用純酒精進一步清洗耳石表面以除去有機質，最后將耳石移入細胞培養板并在室溫條件下晾干；

b、取耳石固定模具，該耳石固定模具為內徑在25~30毫米、高度在30~40毫米的且一端具有底板的圓管狀物體，使用AB膠水將已經晾干的耳石固定在耳石固定模具的底板上，使得耳石較為彎曲的一面與耳石固定模具的底板上表面接觸，備用；

c、將環氧樹脂與三乙烯四氨依次加入到器皿中并攪拌均勻配制成試劑，環氧樹脂與三乙烯四氨的質量比為6 ~7:1；

d、將試劑加入到耳石固定模具中，每個耳石固定模具對應加入3.5~4克試劑，然后將模具型腔放入壓力為0.15~0.36 巴的真空鑲嵌機內抽氣以去除耳石固定模具中試劑內的氣泡，最后將耳石固定模具放入35~38℃的烘箱內烘烤，使得耳石固定模具內的試劑凝固，形成圓柱狀樹脂；

e、將圓柱狀樹脂從耳石固定模具內取出，先使用粗砂紙粗磨具有耳石的圓柱狀樹脂的一端，再用細砂紙精磨耳石，使得耳石大部分暴露，但耳石核心尚未暴露；

f、將AB膠水加熱融化呈水樣后，取水樣AB膠滴在寫好樣本號的載玻片上，隨后將打磨至耳石暴露的圓柱狀樹脂以耳石暴露的一面向下黏貼在載玻片上，壓緊并去除氣泡，靜置使得AB膠水凝固；

g、使用切割機切除載玻片另一端對應的圓柱狀樹脂，使用砂紙打磨耳石，使得耳石的核心暴露，使用拋光機并依次采用拋光液和自來水對耳石的核心面進行連續拋光，最后使用切割機切去除耳石及樣本標簽外多余的玻璃和樹脂部分，得到耳石切片；

h、將耳石切片清洗干凈后用35~38℃的烘箱烘干。