[發明專利]一種刀鱭耳石微化學分析前處理的方法

有效

• 申請號: 201510605215.0
• 申請日: 2015-09-21
• 公開（公告）號: CN105136541B
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 姜濤;劉洪波;楊健
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙)32104
• 代理人: 殷紅梅,涂三民

1.一種刀鱭耳石微化學分析前的處理方法，其特征是該處理方法包括以下步驟：

a、耳石在經過摘取后，首先使用去離子水清洗以除去粘液和包膜，然后用純酒精進一步清洗耳石表面以除去有機質，最后將耳石移入細胞培養板并在室溫條件下晾干；

b、取耳石固定模具，該耳石固定模具為內徑在25~30毫米、高度在30~40mm的且一端具有底板的圓管狀物體，使用AB膠水將已經晾干的耳石固定在耳石固定模具的底板上，使得耳石較為彎曲的一面與耳石固定模具的底板上表面接觸，備用；

c、將環氧樹脂與三乙烯四氨依次加入到器皿中并攪拌均勻配制成試劑，環氧樹脂與三乙烯四氨的質量比為6~7:1；

d、將試劑加入到耳石固定模具中，每個耳石固定模具對應加入3.5~4克試劑，然后將耳石固定模具放入壓力為0.15~0.36 巴的真空鑲嵌機內抽氣以去除耳石固定模具中試劑內的氣泡，最后將耳石固定模具放入35~38℃的烘箱內烘烤，使得耳石固定模具內的試劑凝固，形成圓柱狀樹脂；

e、將圓柱狀樹脂從耳石固定模具內取出，先使用粗砂紙粗磨具有耳石的圓柱狀樹脂的一端，再用細砂紙精磨耳石，使得耳石大部分暴露，但耳石核心尚未暴露；

f、將AB膠水加熱融化呈水樣后，取水樣AB膠滴在寫好樣本號的載玻片上，隨后將打磨至耳石暴露的圓柱狀樹脂以耳石暴露的一面向下黏貼在載玻片上，壓緊并去除氣泡，靜置使得AB膠水凝固；

g、使用切割機切除載玻片另一端對應的圓柱狀樹脂，先用70微米砂輪打磨至耳石即將暴露，再用500目砂紙打磨耳石樹脂片至耳石剛要暴露，最后換用1200目砂紙進行精磨至正反金相顯微鏡下都能看清耳石核心，使用拋光機并依次采用拋光液和自來水對耳石的核心面進行連續拋光，先用拋光液進行拋光2~3分鐘，隨后換用自來水拋光1~2分鐘，拋光后耳石切片使用金相顯微鏡的反射光進行檢查，確定表面無明顯劃痕后，最后使用切割機切去除耳石及樣本標簽外多余的玻璃和樹脂部分，得到耳石切片；

h、將耳石切片清洗干凈后用35~38℃的烘箱烘干；

步驟a具體為：耳石在經過摘取后，使用去離子水清洗3~4分鐘以除去粘液和包膜，再用純酒精進一步清洗表面有機質1~2分鐘，并在8~10倍的放大鏡下檢查是否有殘留有機質，隨后將耳石移入48孔細胞培養板，并在室溫條件下晾干10~15小時；

步驟b中，在干凈的鋁箔紙上取用3~4毫升的AB膠水并攪拌1~2分鐘后，在酒精燈上加熱10~20秒使AB膠水呈水樣后，然后取0.05~0.1毫升的AB膠水滴加在耳石固定模具的底板上表面上，將干燥好的耳石的較為彎曲的一面放置于AB膠水上，下壓至與底板接觸，并確認其呈水平放置后靜置45~60分鐘等待AB膠水充分凝固。

2.如權利要求1所述的一種刀鱭耳石微化學分析前的處理方法，其特征是：步驟d中，抽氣時間控制在15~20分鐘。

3.如權利要求1所述的一種刀鱭耳石微化學分析前的處理方法，其特征是：步驟e具體為：將已經凝固的圓柱狀樹脂從耳石固定模具內取出，先在500目砂紙上粗磨至耳石將要暴露后，換用1200目砂紙繼續精磨至耳石大部分暴露，但耳石核心尚未暴露。

4.如權利要求1所述的一種刀鱭耳石微化學分析前的處理方法，其特征是：步驟f具體為：在干凈的鋁箔紙上以每個樣品取用2~3毫升的AB膠水的標準取用AB膠水并攪拌1~2分鐘后，在酒精燈上加熱10~20 秒使其呈水樣后，在一塊中間寫好樣本號的載玻片上滴3~4毫升的混勻后的AB膠水，隨后將打磨至耳石暴露的樹脂塊以耳石暴露的一面向下黏貼在載玻片上，壓緊并去除氣泡，等待45~60分鐘使AB膠水充分凝固。

5.如權利要求1所述的一種刀鱭耳石微化學分析前的處理方法，其特征是：步驟h具體為：用去離子水清洗切下的耳石切片6遍后，將耳石切片放于干凈的燒杯中，并加入適量Milli-Q水超聲清洗3~6 分鐘，將超聲清洗后的耳石切片取出，并再次用Milli-Q水淋洗6遍，將清洗好的耳石切片放置于干凈紙巾上并放置于培養皿內，隨后放入35~38°C烘箱干燥12~24小時即完成耳石切片制作。