[發明專利]豌豆抗白粉病等位基因er1-7的Indel標記及其應用

在審

• 申請號: 201510599010.6
• 申請日: 2015-09-18
• 公開（公告）號: CN105154442A
• 公開（公告）日: 2015-12-16
• 發明（設計）人: 孫素麗;朱振東;鄧東;王仲怡;李銀萍;段燦星;武小菲;王曉鳴
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

技術領域

本發明屬于植物病理和農作物抗病遺傳育種領域，具體涉及一種與豌豆抗白粉病er1等位基因er1-7共分離的Indel標記及其應用。

背景技術

由白粉菌(ErysiphepisiD.C.)引起的豌豆白粉病是世界性的重要病害。在生產上造成25％～50％的產量損失，嚴重感染的豌豆品種損失可達80％以上(Nisaretal.,2011；Fondevillaetal.,2012)。豌豆白粉病在我國南、北豌豆產區均有的發生。氣候條件適宜的情況下，感病品種的侵染率高達100％，極大地影響豌豆產量和品質，造成嚴重的經濟損失(彭化賢等，1991)。

種植抗病品種是防治豌豆白粉病最為經濟、有效且環境安全的一種方法。目前，國外已經鑒定了大量的抗白粉病豌豆資源，并在抗性資源中鑒定了3個獨立遺傳的抗白粉病基因，包括兩個隱性基因(er1，er2)和一個顯性基因(Er3)(Harlandetal.,1948；Heringaetal.,1969)。迄今，除在豌豆資源JI2480中鑒定抗性基因er2和在一個豌豆野生種P.fulvum中鑒定Er3外，大量抗性資源篩選和遺傳分析方面的研究表明，許多不同地理起源的抗白粉病豌豆資源的抗性均由隱性基因er1控制(Tiwarietal.,1997；Ghafooretal.,2012；Liuetal.,2003；Vaidetal.,1997)。因此，目前生產中應用的抗白粉病豌豆資源的抗性均由er1控制。er1基因的抗性機制是抑制病原菌對寄主表皮細胞的侵入，表現高抗或免疫，抗性不受環境條件的影響，具有廣譜、持久抗性，已在歐洲、北美洲及澳大利亞的豌豆育種中廣泛應用(Fondevillaetal.,2007)。隱性抗病基因er1和er2分別被定位在豌豆遺傳圖譜的第6連鎖群(LGVI)(Timmermanetal.,1994)和第3連鎖群(LGⅢ)(Katochetal.,2010)上，而顯性基因Er3在豌豆遺傳圖譜上的位置還不確定(Fondevillaetal.,2007)。

最近，Humphryetal.(2011)和Pavanetal.(2011)等研究發現，豌豆抗白粉病基因er1是由與大麥感白粉病基因(MLO)序列同源PsMLO功能喪失而產生的。在自然條件下，豌豆PsMLO同源序列發生堿基缺失、插入、替換等導致不同的er1等位基因產生,即er1-1、er1-2、er1-3、er1-4和er1-6(Humphryetal.,2011；Sunetal.,2015)。最近，通過化學誘變劑處理豌豆感白粉病品種也獲得了er1另一個等位基因er1-5(Pereiraetal.,2010)。隨后，基于不同分子標記技術,Pavan等(2013)和Sun等(2015)開發了er1的6個等位基因的功能分子標記,除了等位基因er1-5和er1-6的功能標記已在遺傳群體中驗證，其它4個等位基因的功能標記的有效性尚未被驗證。

發明內容

本發明的目的是提供一種與豌豆抗白粉病基因er1-7共分離的Indel標記，基于該標記的試劑盒及制備方法，以及所述標記或試劑盒在篩選抗白粉病豌豆種質資源方面的應用。

本發明的技術方案如下：

與豌豆抗白粉病基因er1-7共分離的Indel標記，其特征在于，用于擴增所述Indel標記的引物具有如下核苷酸序列：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；

所述引物擴增的與豌豆抗白粉病基因er1-7共分離的Indel標記特征條帶為183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。

用于篩選包含豌豆抗白粉病基因er1-7的豌豆種質資源的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的Indel標記引物；

所述Indel標記引物的核苷酸序列如下：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；

所述引物擴增的與豌豆抗白粉病基因er1-7共分離的Indel標記特征條帶為183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。

所述試劑盒還包括進行PCR反應和/或電泳所需的試劑；