[發(fā)明專利]豌豆抗白粉病等位基因er1-7的Indel標記及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510599010.6
• 申請日: 2015-09-18
• 公開（公告）號: CN105154442A
• 公開（公告）日: 2015-12-16
• 發(fā)明（設計）人: 孫素麗;朱振東;鄧東;王仲怡;李銀萍;段燦星;武小菲;王曉鳴
• 申請（專利權）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

1.與豌豆抗白粉病基因er1-7共分離的Indel標記，其特征在于，用于擴增所述Indel標記的引物具有如下核苷酸序列：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；

所述引物擴增的與豌豆抗白粉病基因er1-7共分離的Indel標記特征條帶為183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。

2.用于篩選包含豌豆抗白粉病基因er1-7的豌豆種質資源的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的Indel標記引物；

所述Indel標記引物的核苷酸序列如下：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；

所述引物擴增的與豌豆抗白粉病基因er1-7共分離的Indel標記特征條帶為183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。

3.根據(jù)權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括進行PCR反應和/或電泳所需的試劑；

所述PCR反應所需的試劑包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液、標準陽性模板、雙蒸水和/或PCRMasterMix；

所述電泳所需的試劑包括：TE緩沖液、聚丙烯酰胺、瓊脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸銀。

4.權利要求2或3任一所述的試劑盒的制備方法，其特征在于，組裝試劑盒的試劑中包括所述Indel標記引物；

所述Indel標記引物的核苷酸序列如下：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT。

5.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于，組裝試劑盒的試劑中還包括PCR反應和/或電泳所需的試劑；

所述PCR反應所需的試劑包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液、標準陽性模板、雙蒸水和/或PCRMasterMix；

所述電泳所需的試劑包括：TE緩沖液、聚丙烯酰胺、瓊脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸銀。

6.權利要求1所述Indel標記或權利要求2-3任一所述試劑盒在鑒定包含豌豆抗白粉病基因er1-7的豌豆種質資源方面的應用，包括如下步驟：

(1)采用所述Indel標記引物對待測豌豆材料的基因組DNA進行PCR擴增；所述Indel標記引物的核苷酸序列如下：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；

(2)對擴增結果進行電泳檢測；

(3)從電泳結果中篩選出與豌豆抗白粉病基因er1-7共分離的Indel標記特征條帶一致的材料；

所述與豌豆抗白粉病基因er1-7共分離的Indel標記特征條帶為183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。

7.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系為：豌豆基因組DNA2ng/μl,2×PCRMasterMix0.4μl/μl，上下游引物各0.2μmol/L，其余為雙蒸水。

8.根據(jù)權利要求6或7所述的應用，其特征在于，所述PCR擴增的反應條件為：95℃預變性5分鐘；以94℃30秒，45℃-63℃30秒，72℃30秒為1個循環(huán)，35個循環(huán)；72℃10分鐘。

9.根據(jù)權利要求6-8任一所述的應用，其特征在于，所述電泳檢測指，采用6％的聚丙烯酰胺凝膠或者3.5％的瓊脂糖凝膠，于120V恒功率電泳分離，最后銀染顯色。