[發明專利]藻體富里酸的XAD?8樹脂分級方法

有效

• 申請號: 201510586114.3
• 申請日: 2015-09-16
• 公開（公告）號: CN105085935B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 吳豐昌;白英臣;郭飛;陳曲;宋凡浩
• 申請（專利權）人: 中國環境科學研究院
• 主分類號: C08H99/00
• 分類號: C08H99/00;C07G99/00
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙)11470
• 代理人: 劉曄

1.藻體富里酸的XAD-8樹脂分級方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟a、藻體預處理：

取風干后的藻體剔除雜物，在30-50^oC條件下烘干20-28 h，碾磨過篩，得到藻體粉末；

步驟b、藻體索氏提取：

將藻體粉末置于索式提取器中，用乙醚為提取液進行索氏提取，所得固體標記為乙醚索提藻體；

將乙醚索提藻體置于索式提取器中，用丙酮為提取液進行索氏提取，所得固體標記為丙酮索提藻體；

將丙酮索提藻體置于索式提取器中，用95%乙醇為提取液進行索氏提取，所得固體標記為乙醇索提藻體；

將乙醇索提藻體置于索式提取器中，用二氧雜環己烷為提取液進行索氏提取，所得固體標記為二氧雜環己烷索提藻體；

將二氧雜環己烷索提藻體置于索式提取器中，用去離子水為提取液進行索氏提取，所得固體標記為去離子水索提藻體；

步驟c、藻體的氯化鈣處理：

向去離子水索提藻體中加入氯化鈣溶液，使固液比達到1：10，在50-70^oC條件下連續攪拌15 -30min，離心分離后棄去上層清液，得到氯化鈣處理藻體1；

向氯化鈣處理藻體1中加入氯化鈣溶液，使固液比達到1：10，在50-70^oC條件下連續攪拌15-30 min后，離心分離后棄去上層清液，得到氯化鈣處理藻體2；

向氯化鈣處理藻體2中加入去離子水，使固液比達到1：10，連續攪拌10-30 min后，離心分離后棄去上層清液，得到去離子水處理藻體；

向去離子水處理藻體中加入鹽酸，使固液比達到1：10，連續攪拌10-30 min后，離心分離后棄去上層清液，得到鹽酸處理藻體1；

向鹽酸處理藻體1中加入鹽酸，使固液比達到1：10，連續攪拌10 -30min后，離心分離后棄去上層清液，得到鹽酸處理藻體2；

向鹽酸處理藻體2中加入鹽酸，使固液比達到1：10，連續攪拌10-30 min后，離心分離后棄去上層清液，得到鹽酸處理藻體3；

向鹽酸處理藻體3中加入去離子水，使固液比達到1：10，連續攪拌10 -30min后，離心分離后棄去上層清液，得到水洗鹽酸處理藻體；

步驟d、藻體的碳酸鈉處理：

向水洗鹽酸處理藻體中加入碳酸鈉溶液，使固液比達到1：10，在30-45^oC條件下連續攪拌30-60 min后，離心所得固體標記為碳酸鈉處理藻體1；

向碳酸鈉處理藻體1中加入碳酸鈉溶液，使固液比達到1：10，在30-45^oC條件下連續攪拌30-60 min后，離心所得固體標記為碳酸鈉處理藻體2；

向碳酸鈉處理藻體2中加入去離子水，使固液比達到1：10，連續攪拌10-30 min后，離心所得固體標記為水洗碳酸鈉處理藻體；

步驟e、藻體的堿液提取：

氮氣保護條件下，向水洗碳酸鈉處理藻體中加入氫氧化鈉和焦磷酸鈉，并用去離子水稀釋，使氫氧化鈉和焦磷酸鈉濃度均為0.1 mol/L且固液比為1:10，攪拌4-6 h，靜置20-28h后，離心得到上層清液1和藻體殘渣1；

氮氣保護條件下，向上層清液1中加入鹽酸，使其pH =1.0-3.0，攪拌30-60 min，靜置20-28h后，離心得上層清液標記為富里酸1；

氮氣保護條件下，向藻體殘渣1中加入氫氧化鈉和焦磷酸鈉，并用去離子水稀釋，使氫氧化鈉和焦磷酸鈉濃度均為0.1 mol/L且固液比為1:10，攪拌4 -6h，靜置20-28 h后，離心得到上層清液2和藻體殘渣2；

氮氣保護條件下，向上層清液2中加入鹽酸，使其pH =1.0-3.0，攪拌30-60 min，靜置20-28h后，離心得上清液標記為富里酸2；

將富里酸1和富里酸2合并，標記為粗提富里酸溶液；

步驟f：藻體富里酸的樹脂吸附：

將粗提富里酸溶液以10-15倍柱體積/h的流速通過XAD-8樹脂柱，棄去流出液；

步驟g：富里酸亞組分分級淋洗：

用pH=2的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗步驟f中的XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當測得流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=2的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4-6 h后，靜置20-28 h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分1；

然后用pH=3的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當測得流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=3的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4 -6 h后，靜置20-28 h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分2；

然后用pH=4的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當測得流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=4的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4 -6 h后，靜置20-28h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分3；

然后，用pH=5的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當測得流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=5的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4-6 h后，靜置20-28 h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分4；

然后用pH=6的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當測得流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=6的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4-6 h后，靜置20-28h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分5；

然后用pH=7的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=7的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4-6 h后，靜置20-28h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分6；

然后在氮氣保護條件下，用pH=8的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=8的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4-6 h后，靜置20-28h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分7；

然后在氮氣保護條件下，用pH=9的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 mL流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=9的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4-6 h后，靜置20-28h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分8；

然后在氮氣保護條件下，用pH=10的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=10的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4-6 h后，靜置20-28h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分9；

然后在氮氣保護條件下，用pH=11的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=11的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4-6 h后，靜置20-28h，離心得到上層清液，標記為粗提富里酸亞組分10；

然后在氮氣保護條件下，用pH=12的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=12的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到上清液，標記為粗提富里酸亞組分11；

然后在氮氣保護條件下，用pH=13的0.1 mol/L焦磷酸鈉緩沖液以5-10倍柱體積/h的速度，淋洗樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用紫外分光光度計在特定波長處測定流出液的吸光值，流出液的吸光值先增大后減小，當流出液吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=13的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到上清液，標記為粗提富里酸亞組分12；

步驟h：富里酸亞組分樣品的純化：

將上述12份粗提富里酸亞組分分別加入氫氟酸，當每份酸化液中的氫氟酸濃度為0.3 mol/L時，將其靜置20-28 h，然后分別標記為無硅溶液1～無硅溶液12，共計12份無硅溶液；

將上述12份無硅溶液分別以5倍柱體積/h流速通過XAD-8樹脂柱進行吸附；

吸附完成后，分別用0.65倍柱體積去離子水以15倍柱體積/h的流速淋洗每份無硅溶液對應的XAD-8樹脂柱，棄去流出液，再依次用1倍柱體積0.1 mol/L氫氧化鈉溶液和2倍柱體積去離子水以3倍柱體積/h的流速淋洗XAD-8樹脂柱，流出液通過氫離子飽和的氫型陽離子交換樹脂交換最終得到的流出液分別標記為富里酸亞組分1～富里酸亞組分12，共計12份富里酸亞組分溶液；

將富里酸亞組分1～富里酸亞組分12分別冷凍干燥，最終得到12份固體富里酸亞組分分級樣品。