[發明專利]一種黃藤組織培養快繁方法

有效

• 申請號: 201510584902.9
• 申請日: 2015-09-15
• 公開（公告）號: CN105145358B
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 王曉峰;李剛;韋坤華;韋瑩;王一諾;梁瑩;繆劍華
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司45104
• 代理人: 黃永校

1.一種黃藤Fibaurea recisa Pierre組織培養快繁方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

（1）外植體的選擇與消毒：取黃藤健壯植株新萌發的嫩芽作為外植體，去除葉片，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，然后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中，無菌水為經高溫高壓滅菌的蒸餾水；

（2）外植體初代誘導獲得無菌試管苗：將步驟（1）得到的外植體置于超凈工作臺內，切成帶有一個腋芽的莖段，接種到MS誘導培養基中，在培養溫度為23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養30天得到無菌試管苗，其中，MS誘導培養基中添加了0.5-1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8；

（3）試管苗叢生芽快速繁殖培養：將步驟（2）中得到的無菌試管苗置于MS叢生芽培養基中，在培養溫度為23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養30天，得到試管苗叢生芽，其中，MS叢生芽培養基中添加了0.5-1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激動素KT、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8；

(4)叢生芽壯苗培養：將步驟（3）中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養基中，在培養溫度為23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養30天得到健壯植株，其中MS壯苗培養基中添加了0.1-0.5mg/L吲哚乙酸IAA、0.5-0.1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8；

（5）生根培養：將步驟（4）中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養基中，在培養溫度為23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養30天得到完整帶根苗，其中，1/2MS生根培養基中添加了0.5-1.0mg/L的萘乙酸NAA、30g/L的香蕉泥、10g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8；

（6）煉苗移栽：將所述完整帶根苗在室溫下煉苗4-7天，待表面角質形成后將苗取出，洗凈根部培養基立即移栽到按質量比為蛭石：泥炭土=1：1的基質中，生長一個月后移栽到大田。