[發明專利]一種黃藤組織培養快繁方法

有效

• 申請號: 201510584902.9
• 申請日: 2015-09-15
• 公開（公告）號: CN105145358B
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 王曉峰;李剛;韋坤華;韋瑩;王一諾;梁瑩;繆劍華
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司45104
• 代理人: 黃永校

技術領域

本發明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種黃藤組織培養快繁方法。

背景技術

黃藤(Fibaurea recisa Pierre)別名土黃蓮、黃蓮藤，為防已科多年生藤本植物。以藤莖或根為主要藥用部位，具有清熱解毒、利尿通便、治療飲食中毒、咽喉腫痛、霉菌性陰道炎等重要作用。隨著相關制劑，如：黃藤分散片、復方黃藤洗劑、黃藤素片、黃藤素栓等的深入開發利用，對黃藤資源的需求也日益增加，但因少有黃藤人工栽培，藥用黃藤主要靠采挖野生資源，以致其野生資源遭到毀滅性的破壞。

黃藤雌雄異株，為天然異花授粉植物，結實率易受環境影響，兼之種子成熟期長，不易長期保存，否則容易喪失活力，因此，自然狀態下黃藤種子的數量和質量缺乏保證；且種子苗遺傳背景雜合，不能完全代表母株的遺傳特性，后代植株差異不齊。無性繁殖具有保持親本遺傳性狀的優點，但黃藤無性繁殖只有扦插相關的研究報道，且尚無明確的成苗情況和繁殖效率比較研究(閆志剛等.吲哚丁酸和萘乙酸對黃藤插穗生根的影響.時珍國醫國藥,2008(19):2)。

發明內容

本發明的目的是提供一種黃藤組織培養快繁方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優良黃藤種苗、滿足生產需要。

本發明通過以下技術方案達到上述目的：一種黃藤組織培養快繁方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇與消毒：取黃藤健壯植株新萌發的嫩芽作為外植體，去除葉片，依次用2％洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加了2-3滴吐溫-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，然后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經高溫高溫高壓滅菌的蒸餾水；

(2)外植體初代誘導獲得無菌試管苗：將步驟(1)得到的外植體置于超凈工作臺內，切成帶有一個腋芽的莖段，接種到MS誘導培養基中，在培養溫度為23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養30天得到無菌試管苗，其中MS培養基中添加了0.5-1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，

(3)試管苗叢生芽快速繁殖培養：將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養基中，在培養溫度為23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養基中添加了0.5-1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激動素KT、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，

(4)叢生芽壯苗培養：將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養基中，在培養溫度為23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養30天得到健壯植株，其中MS壯苗培養基中添加了0.1-0.5mg/L吲哚乙酸IAA、0.5-0.1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，

(5)生根培養：將步驟(4)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養基中，在培養溫度為23-27℃，光照強度1500lux，光照時間為8-10小時/天的條件下培養30天得到完整帶根苗，其中1/2MS生根培養基中添加0.5-1.0mg/L的萘乙酸NAA、30g/L的香蕉泥、10g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，

(6)煉苗移栽：將所述完整帶根苗在室溫下煉苗4-7天，待表面角質形成后將苗取出，洗凈根部培養基立即移栽到按質量比為蛭石：泥炭土＝1：1的基質中，生長一個月后移栽到大田。

本發明的突出優點在于：

(1)采用本發明所述的培養方法得到的黃藤叢生芽增殖系數達到30-40倍，叢生芽健壯，接種到生根培養基后容易生根，生根率可達95％以上。

(2)采用組織培養的方法能夠在短時間內培育出大量適合栽培種植的黃藤幼苗，保障黃藤種苗的增殖系數和種苗質量，實現規模化生產，滿足生產上的需要。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。

實施例1

本發明所述的黃藤的組織培養快繁方法的一個實例，包括以下步驟：