[發(fā)明專利]小麥3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因TaHMGR及其分離克隆、定點(diǎn)突變及酶功能的檢測方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201510577646.0 | 申請(qǐng)日： | 2015-09-11 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN105112430B | 公開（公告）日： | 2019-03-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楚秀生;劉洋洋;崔德周;郭棟;樊慶琦;隋新霞;黃承彥 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/53 | 分類號(hào)： | C12N15/53;C12N9/04 |
| 代理公司： | 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205 | 代理人： | 苗峻 |
| 地址： | 250100 山東省濟(jì)南市歷城*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 小麥 羥基 甲基 戊二酰 輔酶 還原酶 基因 tahmgr 及其 分離 克隆 定點(diǎn) 突變 功能 | ||
1.小麥3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因
1.1密碼子突變引物的設(shè)計(jì)
突變體的上下游引物分別為：
I93VF:CGTGGGCGTCGCCGGGCCGC，其核苷酸序列如Seq ID No.16所示，I93VR:GCGGCCCGGCGACGCCCACG，其核苷酸序列如Seq ID No.17所示，密碼子由ATC突變?yōu)镚TC；
1.2突變體的PCR擴(kuò)增
以構(gòu)建的小麥3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因催化區(qū)野生型表達(dá)載體質(zhì)粒為DNA模板，合適的退火溫度，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
1.3突變體PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化、測序
用Dpn1限制性內(nèi)切酶去除模板質(zhì)粒DNA，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，提取質(zhì)粒DNA并測序確定突變位點(diǎn)；將陽性克隆轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌株中，進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)。
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