[發明專利]一種具有抗氧化活性的人參蛋白及其制備方法

在審

• 申請號: 201510576340.3
• 申請日: 2015-09-11
• 公開（公告）號: CN105175487A
• 公開（公告）日: 2015-12-23
• 發明（設計）人: 孫立偉;姜銳;麻銳;馮凱;劉建增;徐曉浩
• 申請（專利權）人: 北華大學
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
• 代理公司: 長春市東師專利事務所 22202
• 代理人: 劉延軍;李榮武

技術領域

本發明屬于植物蛋白質分離純化技術領域，具體涉及一種具有抗氧化活性的人參蛋白制備方法。

背景技術

人參，屬五加科人參屬，為多年生宿根草本植物，是國內外公認的藥用保健珍品，被譽為“百草之王”。作為一味名貴藥材，人參在歷史悠久的中醫學中，有著自己舉足輕重的地位。人參中含有多種功效成分，包括人參皂苷、酚酸、多糖、蛋白質、揮發油等。研究表明，人參蛋白具有良好的抗氧化、調節血糖、血脂、抗衰老、提高免疫力的作用。我們在前期研究工作中發現，人參蛋白不但能夠提高正常小鼠體內SOD和MDA含量，而且可以提高輻射小鼠體內SOD和MDA含量，具有一定的清除自由基和抗氧化作用，且以對受損機體產生的過量自由基清除效果較明顯，可見人參蛋白具有較好的抗氧化作用。近些年，隨著人們健康、保健意識的提高，中藥保健品及食品市場正在迅速發展。到目前為止，全球中藥保健品及食品的銷售已超過1000億美元，并還在以平均每年增長率為百分之二。因此中藥保健品及食品存在著巨大的市場開發潛力。而由于社會和科技的發展使得人們的生活節奏越來越快，工作、學習和生活的壓力也越來越快，同時吸煙、不良化妝品、環境污染等外源性因素，進而引起人體內過量自由基蓄積，超出人體自身的自由基清除能力，引發衰老、腫瘤、心腦血管、老年性癡呆等疾病。因此，針對于中老年人群，生活節奏快、工作壓力大的上班族，學業繁重的學生族及更年期的婦女，開發具有抗氧化功效的保健食品及食品，保持他們的良好精神狀態，提高其身體各器官機能，緩解亞健康狀態，具有十分廣闊的市場前景。

在傳統人參加工方式中，人參蛋白一直是被忽略乃至摒棄的成分。因此，一直以來均缺乏適合于工業化生產的人參蛋白大規模制備技術，具有抗氧化活性的人參蛋白制備技術未見報道。現有對植物蛋白提取的方法，主要包括硫酸銨沉淀法、有機試劑提取法、膜過濾法等。硫酸銨沉淀法是最常見的蛋白質提取方法，但它周期長，操作繁瑣，需要透析除鹽，并且長時間透析對蛋白質構象和活性會產生很多不利影響，不適合大規模生產；有機試劑提取法所用試劑包括丙酮、三氯乙酸等，易引起蛋白質變性，有機試劑成本高、不易去除、安全性差，同樣不適合食品和保健品的生產。超濾技術，不需要透析，無毒，生產周期短，提取蛋白質純度高、活性好，十分適合大規模生產富集高活性中藥蛋白質。凝膠層析所選用的載體為惰性載體，不帶電荷，吸附力弱，操作簡單，條件溫和，無需有機溶劑且不影響樣品的理化性質。本發明利用超濾技術及凝膠層析建立人參蛋白的制備方法，制備的人參蛋白具有較好的抗氧化活性，并且制備方法簡便，適用于工業生產，可用于保健食品及食品開發。

發明內容

本發明的目的是提供了一種具有抗氧化活性的人參蛋白制備方法，其制備步驟如下：

（1）、將新鮮人參清洗后切成小塊，按著1:3-1:8的比例加入pH值為7-8的0.01mol/LTris-HCl緩沖液或蒸餾水攪拌均勻后，置于0-10℃環境下每次浸提3-10小時，浸提2-4次，合并浸提后的上清液，即得人參蛋白粗提液。

（2）、上述制備的人參蛋白粗提液經過0.22-0.45μm濾膜過濾澄清后，將其置于截留分子量為5-30KDa的超濾膜裝置進行超濾，分離去除小分子化合物。

（3）將超濾濃縮后的浸提液用Sephadex-G75凝膠層析，層析柱規格為16*200mm，上樣量為柱體積的5%-20%，流速0.5-1.0cm/min，在280nm紫外吸收下檢測出峰并收集、凍干，即得人參蛋白。

附圖說明

附圖為本發明實施例1-4中制備的人參蛋白SDS-PAGE圖譜。

其中：1.蛋白marker、2.實施例1圖譜、3.實施例2圖譜、4.實施例3圖譜、5.實施例4圖譜。

具體實施方式

實施例1

（1）、將新鮮人參清洗后切成小塊，按著1:8的比例加入pH值為7的0.01mol/LTris-HCl緩沖液攪拌均勻后，置于4℃環境下浸提4小時，浸提2次，合并浸提后的上清液，即得人參蛋白粗提液。

（2）、上述制備的人參蛋白粗提液經過0.22-0.45μm濾膜過濾澄清后，將其置于截留分子量為5-30KDa的超濾膜裝置進行超濾，分離雜質及皂苷的小分子化合物。

（3）將超濾濃縮后的浸提液用Sephadex-G75凝膠層析，層析柱規格為16*200mm，上樣量為柱體積的5%，流速1.0cm/min，在280nm紫外吸收下檢測出峰并收集、凍干，即得人參蛋白。