[發明專利]一種羥丙基殼聚糖取代度的測定方法

有效

• 申請號: 201510575791.5
• 申請日: 2015-09-11
• 公開（公告）號: CN105136710B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 張永勤;張捷;張坤;張躍
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: G01N21/3563
• 分類號: G01N21/3563
• 代理公司: 青島中天匯智知識產權代理有限公司 37241
• 代理人: 萬桂斌

1.一種羥丙基殼聚糖取代度的測定方法，包括以下步驟：

⑴干燥羥丙基殼聚糖樣品以除去水分，其中每個羥丙基殼聚糖樣品均通過羥丙基化反應和脫堿法純化制得，并來源于脫乙酰度已知的同一原料殼聚糖或脫乙酰度與其原料殼聚糖相差不超過3%的殼聚糖；

所述干燥羥丙基殼聚糖樣品以除去水分的具體干燥方法為：取適量羥丙基殼聚糖樣品于離心管 中，置于烘箱中在 80℃干燥 5 小時，然后迅速升溫至 105℃，再干燥 1.5 小時，干燥完畢后迅速將離心管的蓋子合上，放入裝有氧化鈣的干燥器中備用；

所述脫堿法純化選自部分中和透析脫堿法：首先將產物混合液抽濾以除去溶劑和殘堿，將抽濾后 粗品加水溶解、過濾，于濾液中加入鹽酸使濾液被部分中和至 pH10 以上，然后，通過超濾脫堿，同時脫去 NaCl，將濾液減壓濃縮，經冷凍干燥或噴霧干燥即得到羥丙基殼聚糖樣品；

⑵ 建立檢測模型

a. 利用紅外吸收光譜儀獲得步驟⑴中干燥過的具有不同取代度的羥丙基殼聚糖樣品的紅外吸收光譜圖；

所述利用紅外吸收光譜儀獲得不同取代度的羥丙基殼聚糖樣品的紅外吸收光譜圖的具體操作為：壓制樣品片，取適量KBr及樣品于研缽中，以壓制空片的同樣步驟壓片并檢測，其中，樣品分別為殼聚糖樣品0號，取代度依次遞增的羥丙基殼聚糖樣品1-7號，樣品加入量為1-2mg，要求所獲得的紅外吸收光譜圖中絕大多數吸收峰處于30%-100%透光率范圍內；

所述利用紅外吸收光譜儀得到不同取代度的羥丙基殼聚糖樣品的紅外吸收光譜圖之前，需要進行背景檢測，進行扣背景處理；

所述背景檢測的具體操作為：壓制空片，取適量KBr于研缽中，將其研磨至不再有肉眼可見的小顆粒，以保證壓片的均勻度和透明度，研磨完成后，將KBr粉末裝入試樣槽中，攤平，裝上其它部件后放入壓片機中央，轉動螺桿以固定住模具，上下壓動手桿，使壓力在12-25MPa之間，時間控制在0.5-1min即可，將已經壓好的KBr片脫模，用鑷子將KBr片放入紅外吸收光譜儀的檢測器中進行背景檢測；

所述的紅外吸收光譜儀為傅里葉變換紅外光譜儀；

所述的紅外吸收光譜儀的檢測條件為：掃描范圍4000-400cm^-1，掃描16次，分辨率為4cm^-1；

b. 利用紅外吸收光譜儀的應用軟件，從a步驟中所得到紅外吸收光譜圖測得以整個波形3880-1880cm^-1的波谷連線為基線的甲基特征峰2971-2962cm^-1的峰強度的吸光度值A1；測得包括酰胺特征峰和氨基特征峰在內的整個波形1740-1515cm^-1的面積的吸光度值A2，以其波谷連線為基線；從而得到A1與A2的比值的100倍的對數X；

c.以標準方法測得a步驟中的羥丙基殼聚糖樣品的取代度Y；

所述的標準方法為元素分析法，

所述元素分析法的步驟為：首先，制作標準曲線：以乙酰苯胺作為標準物質，建立質量梯度標準曲線；然后，分別稱取2-4mg0號-7號樣品，放入錫舟中，準確稱重后將錫舟折疊密封，放入樣品池中進行測定，每個樣品做三個平行樣，最后結果取平均值，首先通過計算得到殼聚糖樣品0號的脫乙酰度為95.1%，然后即可在此基礎上計算得到羥丙基殼聚糖樣品1-7號的取代度Y；

d. 以b步驟中所得到的比值X對c步驟中所得到的羥丙基殼聚糖樣品的取代度Y建立線性良好的回歸模型，即Y=kX+b，從而獲得模型中k和b的具體數值；

⑶ 檢測：將待測羥丙基殼聚糖樣品按照步驟⑴的方法干燥，從步驟⑵中a步驟得到紅外吸收光譜圖，按照步驟⑵中b步驟得到比值X，代入步驟⑵中d步驟所得到的線性回歸模型，即可通過計算得到待測羥丙基殼聚糖樣品的取代度Y。