[發明專利]一種核桃經酶解制備的多肽原料及其應用

在審

• 申請號: 201510574512.3
• 申請日: 2015-09-10
• 公開（公告）號: CN105063152A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: 趙宏偉;郭曉蕾;馬忠華;蘇國萬;趙謀明
• 申請（專利權）人: 無限極（中國）有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;A23L1/29;A61K38/01;A61P25/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，特別涉及一種核桃經酶解制備的多肽原料及其應用。

背景技術

引起記憶退化的原因有三種：老化引起的記憶退化，壓力等引起的記憶衰退，先天性或者機械損傷引起的記憶損傷。現如今，社會壓力越來越大，人們的記憶衰退日顯突出，使得更多的科研工作者將目光投向對記憶的改善方面。

現階段研究中多數學者將改善記憶放在中草藥中活性物質的提取和研究，該法涉及工藝復雜和有機試劑的殘留，容易引入安全問題。另一個研究熱點就是卵磷脂和多不飽和脂肪酸深海魚油等等，這些物質原料來源困難，成本昂貴，限制其工業化生產和推廣。近年來，人們對健康食品的需求更加迫切，使得科研工作者將目光投向于具有生理功能的食源性蛋白肽，如奧地利依比威大藥廠以豬腦為原料，結合酸水解和酶水解制備得到85％氨基酸和15％短肽的混合物——腦活素，將其用于臨床治療老年癡呆癥中，具有明顯的治療效果。但是腦活素是一種注射藥物，價格昂貴且使用不方便，使其不適用于普通人群對記憶改善的需求。因此，目前亟待解決的是尋求一種，安全，普遍，高效易于制備的改善記憶肽。

生物活性肽是蛋白質中20種天然氨基酸以不同組成和排列方式構成的線性或環形肽類的總稱，是源于蛋白質的功能性化合物。生命活動中的細胞分化、神經激素遞質調節、免疫調節等都與生物活性肽有一定的相關性。如今，對生物活性肽的研究已經涉及了非常廣泛的方面，例如抗氧化肽，抗菌肽，免疫肽、降血壓肽等。目前生物活性肽的制備方法主要是蛋白質水解法，分為化學水解和生物酶水解，生物酶解法因具有生產條件溫和，水解過程可控，肽得率高以及安全的優勢，逐漸取代了傳統的化學法，成為制備生物活性肽的常用方法。

核桃(JuglansregiaL)又名胡桃、羌桃，屬胡桃科胡桃屬植物，是一種營養價值和經濟價值都很高的珍貴果木。作為一種經濟樹種，核桃在我國的栽培歷史悠久，分布比較廣泛，尤其是在云南、四川、新疆等西南和西北地區種植較多。核桃也是一種高能食品,每100克核桃可提供631kcal能量，其蛋白質和脂類占整個核桃仁重量84％以上，其中脂類占60％左右。核桃蛋白由四種蛋白質構成，分別為清蛋白，球蛋白，醇溶蛋白和谷蛋白，分別占核桃蛋白總量的6.81％，17.57％，5.33％和70.11％。研究表明，植物蛋白不僅資源豐富，價格低廉，與動物蛋白相比，氨基酸組成更加平衡，必需氨基酸含量較高，且不含膽固醇。在核桃中含有18種氨基酸,其中有8種必需氨基酸,精氨酸和谷氨酸含量都相當高，是一種優質的蛋白資源。此外，在所有補腦食品中，核桃自古以來就是“健腦益智”的最佳補品，但人們一直利用的是核桃油，那核桃蛋白也是否擁有益智的作用？有研究表明核桃蛋白也是一種制備改善記憶的優質蛋白原料，可以增強大腦活動，增強記憶力，對青少年用腦過度、中老年記憶衰退的防治具有很好的效果。但由于粕中含有大量的纖維素，且在提取油脂的過程中，造成一定的蛋白質變性，極大增加了利用核桃蛋白制備改善記憶肽的工藝難度。

因此，以核桃粕為原料，高效提取核桃中的蛋白質，再進行改善記憶肽的提取和制備，具有較大的經濟和社會意義。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種核桃經酶解制備的多肽原料及其應用。本發明制得的具有改善記憶功效的核桃蛋白肽可以用于制備改善記憶保健品及藥物。可單獨使用或與其他具有改善記憶作用的中草藥復配按照常規制劑工藝制成保健食品。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種多肽，其由如下步驟制備獲得：

步驟1：取核桃與水混合后研磨，經第一酸堿調節劑調整pH值至8.0～9.0，攪拌、離心，過濾收集濾液；取所述濾液與水解酶混合后酶解，經第二酸堿調節劑調整pH值至4.0～4.2，攪拌、離心，過濾收集濾渣，經醇沉、水洗，獲得核桃蛋白；

步驟2：取步驟1制備獲得的所述核桃蛋白與水混合，經Alcalase2.4L蛋白酶和復合蛋白酶在50-55℃的條件下酶解至水解度8-12％，滅酶，離心，過濾收集濾液，獲得核桃蛋白酶解液；

步驟3：取步驟2制備獲得的所述核桃蛋白酶解液過篩，經10000Da的超濾膜過濾后收集透過液；將所述透過液再經1000Da的超濾膜過濾，收集截留液，獲得分子量在1000-10000Da的核桃肽。

在本發明的一些具體實施方案中，所述核桃可以為可以為核桃植物果實或核桃植物果實獲得的核桃粕。

在本發明的一些具體實施方案中，多肽的制備方法步驟1中水解酶包括α-淀粉酶和/或纖維素酶。