[發明專利]抗禽白血病病毒p27蛋白單克隆抗體，包含該單克隆抗體的金標試紙條及應用

有效

• 申請號: 201510573865.1
• 申請日: 2015-09-10
• 公開（公告）號: CN105198986B
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 高玉龍;王笑梅;唐宏;王牟平;王曉艷;朱海波;祁小樂;王永強;高宏雷
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

本發明公開了抗禽白血病病毒p27蛋白單克隆抗體，包含該單克隆抗體的金標試紙條及應用。本發明的抗禽白血病病毒p27蛋白單克隆抗體由保藏編號為CGMCC NO.11089的雜交瘤細胞株或保藏編號為CGMCC NO.11090雜交瘤細胞株分泌產生。該單克隆抗體對p27蛋白的效價高，特異性好，因此可用于制備檢測禽白血病病毒的試劑盒和金標試紙條。本發明提供的單克隆抗體的制備方法簡單，抗體純化過程簡單，效率高，成本低。采用本發明提供的抗禽白血病病毒p27蛋白單克隆抗體制成的金標試紙條來檢測禽白血病病毒，特異性強，操作簡單，方便、快速、簡捷，不需特殊儀器設備，不需專業培訓，結果清晰易辨，操作簡便，易于推廣，更適合于即時檢測。

技術領域

本發明涉及一種單克隆抗體，特別涉及一種抗禽白血病病毒p27蛋白單克隆抗體，包含該單克隆抗體的金標試紙條及應用，屬于生物技術領域。

背景技術

禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)引起的禽類多種腫瘤性疾病的統稱。ALV屬于反轉錄病毒科，禽C型反轉錄病毒屬。根據病毒感染的宿主范圍、干擾譜和囊膜抗原，可將ALV進一步區分為A至G七個亞群。J亞群禽白血病病毒(ALV-J)最早于1988年在英國分離得到。1999年中國首次報道ALV-J的出現，繼而中國大部分地區相繼出現了ALV感染的現象。ALV大范圍的爆發給我國養禽業帶來了很大的經濟損失。

禽白血病目前沒有有效的防治措施。預防本病的主要方法是淘汰陽性雞，選育出無白血病雞群以凈化種群。因此，該病的準確診斷尤為重要。本發明利用原核表達的重組衣殼蛋白(p27蛋白)免疫小鼠，通過雜交瘤技術最終獲得2株抗p27蛋白的單克隆抗體，命名為4A2和3H11。并且利用兩株單抗研制了檢測禽白血病病毒的金標試紙條。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種抗禽白血病病毒p27蛋白單克隆抗體。

本發明的一種抗禽白血病病毒p27蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述的單克隆單體由保藏編號為CGMCC NO.11089的雜交瘤細胞株或保藏編號為CGMCC NO.11090雜交瘤細胞株分泌產生。

免疫球蛋白亞類鑒定試劑盒測定兩株單抗的的抗體亞型全部是IgG1。單抗特異性鑒定結果表明，IBV，MDV，AIV H5，AIV H7，AIV H9，ILTV，FPV，IBDV，NDV，ARV和REV與兩株單抗反應的OD值均小于0.15，且ALV-J，ALV-A，ALV-B與兩株單抗反應的OD值均大于1.2，表明兩株單抗具有良好的特異性。

本發明利用兩株單抗研制了檢測禽白血病病毒的金標試紙條。用試紙條檢測ALV-J，ALV-A，ALV-B，IBV，MDV，AIV H5，AIV H7，AIV H9，ILTV，FPV，IBDV，NDV，ARV和REV等14種常見的禽類病毒。結果試紙條只與ALV-A，ALV-B和ALV-J抗原反應，說明試紙條具有良好的特異性。用試紙條檢測細胞培養的ALV病毒及體外表達的不同濃度p27蛋白(150ng/ml,75ng/ml,37.5ng/ml,18.75ng/ml,9.375ng/ml)純化的p27蛋白，結果試紙條的靈敏度為18.75ng/ml。用試紙條檢測不同濃度J亞群病毒(4000，2000，1000，500，250，125，62.5TCID50/ml)，結果試紙條的靈敏度為250TCID50/ml。

在此基礎上，本發明提供了所述的單克隆抗體在制備檢測禽白血病病毒的金標試紙條中的應用。及

所述的單克隆抗體在制備檢測禽白血病病毒的試劑盒中的應用。

含有所述的單克隆抗體的檢測禽白血病病毒的金標試紙條也是本發明保護的范圍。及

含有所述的單克隆抗體的檢測禽白血病病毒的試劑盒也是本發明保護的范圍。

本發明的目的之二是提供產生所述單克隆抗體的雜交瘤細胞株。