[發明專利]一種脂肪酶的制備方法

在審

• 申請號: 201510565746.1
• 申請日: 2015-09-09
• 公開（公告）號: CN105112387A
• 公開（公告）日: 2015-12-02
• 發明（設計）人: 鄧永平;艾瑞波;劉曉蘭;鄭喜群
• 申請（專利權）人: 齊齊哈爾大學
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種脂肪酶，以保藏號為CGMCCNo.1836的好食脈孢霉（N.sitophila）菌株17號為菌種，經培養發酵、分離和提純制成，該脂肪酶分子量約為32000Da。

2.一種如權利要求1所述的脂肪酶的培制方法，包括以下步驟：以好食脈孢霉（N.sitophila）菌株17號為菌種，依次經過斜面培養、種子培養、液體發酵生產脂肪酶，再依次經過鹽析和色譜分離技術從發酵產物中分離純化脂肪酶。

3.如權利要求2所述的脂肪酶的種子培養方法，其特征在于：種子培養基含3～5％W/V麩皮、1.5～3％W/V蛋白胨，pH值5.0，250mL三角瓶裝50mL液體種子培養基，121℃滅菌30min，冷卻后每瓶培養基接入10⁵～10⁶個孢子，在28～30℃、150r/min條件下培養20h。

4.如權利要求2所述的脂肪酶的液體發酵方法，其特征在于：發酵培養基含10%W/V麩皮、6%W/V玉米黃粉，0.1%V/V的吐溫-80，0.01W/V%KCl，培養基初始pH6.0，250mL三角瓶裝50mL液體種子培養基，121℃滅菌30min后冷卻，接入1%V/V的液體種子，在33℃培養48小時，經過離心得到含脂肪酶的上清液。

5.如權利要求2所述的鹽析方法分離發酵產物中脂肪酶，其特征在于：將所得到的含脂肪酶的上清液經過30％W/V飽和度硫酸銨鹽析，離心除去沉淀雜質，得到粗酶液。

6.如權利要求2所述的色譜分離技術，其特征在于：鹽析后得到的粗酶液依次經過Octyl-SepharoseFastFlow疏水相互作用色譜和Superdex75凝膠過濾色譜分離純化。