[發明專利]生產洛伐他汀及莫納可林J的基因工程菌的構建與應用

有效

• 申請號: 201510552643.1
• 申請日: 2015-09-01
• 公開（公告）號: CN106701857B
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 蔡孟浩;劉一奇;張元興
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;C12N1/19;C12N15/81;C12R1/84
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種生產洛伐他汀的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供酵母工程菌，所述酵母工程菌中轉化有外源的下組基因的表達盒：LovB，LovC，LovG，LovA，NpgA，LovD，LovF；所述的酵母工程菌是畢赤酵母；和

(2)發酵培養(1)的酵母工程菌，從而生成洛伐他汀產物；發酵過程分為分批階段和補料階段，其中補料階段前期為甘油補料，中后期為甲醇流加補料；其中，在發酵初始期以甘油為碳源促進菌體生長，并提供甘油補料直至菌體生長到250g/L濕重時，停止甘油補料并切換至甲醇補料。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，甲醇補料時，逐步提高甲醇流加速率至16mL/h后維持穩定，每24h添加0.5％的無水甲醇。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，發酵時發酵罐中攪拌轉速在1000rpm。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，發酵液溶氧在30％～60％之間。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，以氨水補料，維持發酵液pH為5.0。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述酵母工程菌的制備包括：

將質粒pPIC Z_BCGN和pPIC 3.5K_A經線性化回收后，先后經電轉化入畢赤酵母感受態，使用具有博來霉素和遺傳霉素抗性的YPD固體培養篩選重組子，獲得轉化入LovB，LovC，LovG，NpgA，LovA基因的畢赤酵母基因工程菌；將線性化后的質粒pAZh_DF經電轉化入該感受態，使用具有潮霉素抗性的固體YPD培養基篩選重組子，獲得轉化入LovB，LovC，LovG，NpgA，LovA，LovD和LovF的畢赤酵母基因工程菌；

其中，質粒pPIC Z_BCGN包含有LovB，LovC，LovG，NpgA基因；質粒pPIC 3.5K_A含有基因LovA；質粒pAZh_DF含有LovD和LovF。