[發明專利]一種重組胰島素及胰島素類似物前體純化方法

有效

• 申請號: 201510548164.2
• 申請日: 2015-08-31
• 公開（公告）號: CN105153294B
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 張穎;孔凡樓;姜壽俊;劉駿;郭鳳霞;徐丹
• 申請（專利權）人: 濟南康和醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07K14/62
• 分類號: C07K14/62;C07K1/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種重組胰島素及胰島素類似物前體純化方法，包括以下步驟：

(1)發酵液前處理：發酵液以酸調節pH，離心獲得含胰島素前體或胰島素類似物前體蛋白的上清液，所得發酵液電導率范圍在10-55mS/cm之間；

(2)平衡：用酸性平衡緩沖液平衡層析柱的柱床；

(3)上樣：將步驟(1)中的上清液上樣至步驟(2)中的層析柱，然后用步驟(2)中的酸性平衡緩沖液沖洗未吸附的雜質；

(4)洗脫：用堿性緩沖液洗脫步驟(3)中的層析柱，得重組胰島素或胰島素類似物前體的洗脫峰；

所述層析柱中的層析填料為Capto S、Capto MMC、Uni PMM S、Uni MSP中的任何一種。

2.根據權利要求1所述的一種重組胰島素及胰島素類似物前體純化方法，其特征在于，步驟(1)發酵液前處理中，調節pH的酸可以是冰乙酸、鹽酸、硫酸、磷酸中的一種或幾種。

3.根據權利要求1所述的一種重組胰島素及胰島素類似物前體純化方法，其特征在于，步驟(1)中發酵液離心上清pH 2.0-6.0。

4.根據權利要求1所述的一種重組胰島素及胰島素類似物前體純化方法，其特征在于，步驟(2)中層析柱用層析填料裝填的高度為8-25cm。

5.根據權利要求1所述的一種重組胰島素及胰島素類似物前體純化方法，其特征在于，步驟(2)和步驟(3)中的酸性平衡緩沖液為甘氨酸-鹽酸緩沖液、鄰苯二甲酸-鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、乙酸-乙酸鈉緩沖液、磷酸鹽緩沖液中的任一種。

6.根據權利要求1所述的一種重組胰島素及胰島素類似物前體純化方法，其特征在于，步驟(2)和步驟(3)中的平衡酸性緩沖液濃度為5～200mM；緩沖液的pH為2.0～6.0。

7.根據權利要求1所述的一種重組胰島素及胰島素類似物前體純化方法，其特征在于，步驟(4)中堿性緩沖液為甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、Tris-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液中的一種緩沖體系。

8.根據權利要求1所述的一種重組胰島素及胰島素類似物前體純化方法，其特征在于，步驟(4)中洗脫堿性緩沖液的濃度范圍為5mM～200mM，pH為8.0～10.0。