[發明專利]紅棗中鏈格孢菌的多重PCR檢測引物及方法

在審

• 申請號: 201510545751.6
• 申請日: 2015-08-31
• 公開（公告）號: CN105039573A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發明（設計）人: 郝莉花;王勇;吳曉宗;董彩文;丁太春;殷柯柯;縱偉;劉燕;周博
• 申請（專利權）人: 河南省產品質量監督檢驗院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 張真真;鄭園

1.紅棗中鏈格孢菌的多重PCR檢測引物，其特征在于：

根據鏈格孢霉特異基因設計特異引物Alt-F1/Alt-R1，所述引物的核苷酸序列為：

Alt-F15-TGTCTTTTGCGTACTTCTTGTTTCCT-3

Alt-R15-CGACTTGTGCTGCGCTC-3。

2.紅棗中鏈格孢菌的多重PCR檢測引物，其特征在于：

根據鏈格孢霉特異基因設計特異引物Alt-F2/Alt-R2，所述引物的核苷酸序列為：

Alt-F25-CTTTTGCGTACTTCTTGTTTCC-3

Alt-R25-CAGGCATGCCCTTTGGATAC-3。

3.紅棗中鏈格孢菌的多重PCR檢測引物，其特征在于：

根據鏈格孢霉特異基因設計特異引物Alt-F1/Alt-R1和Alt-F2/Alt-R2，將引物Alt-F1/Alt-R1與引物Alt-F2/Alt-R2混合，體積比為1:3～3:1，所述引物的核苷酸序列為：

Alt-F15-TGTCTTTTGCGTACTTCTTGTTTCCT-3

Alt-R15-CGACTTGTGCTGCGCTC-3

Alt-F25-CTTTTGCGTACTTCTTGTTTCC-3

Alt-R25-CAGGCATGCCCTTTGGATAC-3。

4.利用如權利要求1或2所述的引物檢測紅棗中鏈格孢菌的多重PCR檢測方法，其特征在于：將霉變紅棗上刮下的菌絲洗滌干燥，液氮研磨后轉移至EP管中，使用試劑盒提取基因組DNA作為PCR反應的模板，按如下PCR反應體系和PCR反應程序對紅棗中鏈格孢菌進行檢測，所述PCR反應體系為50μL：DNA模板2μL，10×緩沖液5μL，2.5mmoL/L的dNTP2μL，10μm/L的引物各2μL，5U/μL的TaqDNA聚合酶0.4μL；無菌水補足至50μL，所述PCR反應程序為：95℃預變性5min，然后94℃變性30s，52℃退火30s，72℃延伸40c，35個循環，72℃延伸10min，反應結束后取5μLPCR，產物加1μL6×溴酚藍上樣緩沖液，在2-5％瓊脂糖凝膠上110V電泳35min，根據條帶有無和大小判定。

5.利用如權利要求3所述的引物檢測紅棗中鏈格孢菌的多重PCR檢測方法，其特征在于：將霉變紅棗上刮下的菌絲洗滌干燥，液氮研磨后轉移至EP管中，使用試劑盒提取基因組DNA作為PCR反應的模板，按如下PCR反應體系和PCR反應程序對紅棗中鏈格孢菌進行檢測，所述PCR反應體系為50μL：DNA模板2μL，10×緩沖液5μL，2.5mmoL/L的dNTP2μL，10μm/L的引物共8μL，按體積比分配，5U/μL的TaqDNA聚合酶0.4μL；無菌水補足至50μL，所述PCR反應程序為：95℃預變性5min，然后94℃變性30s，52℃退火30s，72℃延伸40c，35個循環，72℃延伸10min，反應結束后取5μLPCR，產物加1μL6×溴酚藍上樣緩沖液，在2-5％瓊脂糖凝膠上110V電泳35min，根據條帶有無和大小判定。