[發(fā)明專利]一種定性、定量一體化檢測(cè)乳品摻次的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510542254.0
• 申請(qǐng)日: 2015-08-28
• 公開（公告）號(hào): CN105136953A
• 公開（公告）日: 2015-12-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹成喜;張柳霞;曹毅仁;肖華;樊柳蔭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88;G01N27/447
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國(guó)中;陳少凌

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是生物分析技術(shù)和食品檢驗(yàn)領(lǐng)域，是一種定性、定量一體化檢測(cè)乳品摻次的方法，具體涉及一種從定性甄別食品乳品摻次到定量測(cè)定食品乳品摻次程度的完整分析方法。

背景技術(shù)

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，乳制品由于營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高而受到人們的青睞。然而在利益的驅(qū)動(dòng)下，不法商家會(huì)在乳制品中摻雜其他物質(zhì)。比較常見的摻假方式為在乳制品中添加尿素，三聚氰胺等無機(jī)氮類，或往優(yōu)質(zhì)的乳制品中添加相對(duì)劣質(zhì)的且低成本的蛋白質(zhì)，比如在羊奶、牛初乳中添加豆奶，在驢奶中摻雜牛奶(PizzanoR,SalimeiE.,2014,J.Agric.FoodChem.,62(25),5853–5858.)等，這些行為損害了消費(fèi)者的健康和經(jīng)濟(jì)利益。因此，建立一種檢測(cè)乳制品蛋白質(zhì)的方法顯得尤為重要。

常見的蛋白質(zhì)定量檢測(cè)方法有凱氏定氮法(Kjeldahl,J.Z.,1883,Anal.Chem.,22,366-382.)、BCA法(Smith,P.K.,Krohn,R.I.,Hermanson,etal,1985,Anal.Biochem.,150,76-85.)、雙縮脲法(Cole,E.R.,1969,Rev.PureAppl.Chem.,19,109-130.)、Folin酚法(Lowry,O.H.,Rosebrough,N.J.,Farr,A.,etal,1951,J.Biol.Chem.,193,265-275.)、光譜法(Kennedy,J.F.,White,C.A.,etal,1985,J.FoodChem.,18,95-112.)、紫外吸收法(Layne,E.,1957,Method.Enzymol.,3,447-454.)以及考馬斯亮藍(lán)法(Bradford,M.,1976,Anal.Biochem.,72,248-254.)等。但這些方法無法排除非蛋白氮(nonproteinnitrogen,NPN)的干擾(TerenceL.Fodey,ColinS.Thompson,ImeldaM.Traynor,etal,2011,Anal.Chem.,83,5012–5016.)，并且無法定性的鑒別乳品食品是否摻假、摻假蛋白種類、以及定量檢測(cè)摻假蛋白程度。

目前，能夠用于定性甄別乳品食品摻次的方法主要分為兩類，一類是基于不同乳品間的蛋白質(zhì)指紋差異的聚丙烯酰氨凝膠電泳(PAGE技術(shù))(ChrambachA,RodbardD.,1971,Science,172,440-451.)和十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳的指紋圖譜法(SDS-PAGE技術(shù))(H,VonJagowG.,1987,Anal.Biochem.,166,368-379.)。這類方法僅限于定性的鑒別乳品食品是否摻次，但無法準(zhǔn)確甄別摻蛋白質(zhì)的種類更無法測(cè)定摻次的程度。另一類是基于特定的基因系列與特定蛋白抗原的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(PCR技術(shù))(MafraI,FerreiraIM,FariaMA,etal.,2004,J.Agric.FoodChem.,52,4943-4947.)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA技術(shù))(PizzanoR,SalimeiE.,2014,J.Agric.FoodChem.,62,5853-5858)。這類方法可以甄別乳制品是否摻次及摻次蛋白種類，但無法定量檢測(cè)摻次蛋白的程度。

近來，王和史等人提出移動(dòng)反應(yīng)界面(MRB)電泳界面阻滯信號(hào)(R_MRB)概念和電泳滴定技術(shù)(WangH.,ShiY.,YanJ.,etal,2014,Anal.Chem.86,2888-2894.)，揭示了R_MRB與蛋白質(zhì)濃度的線性關(guān)系。該技術(shù)的顯著特征是在不受NPN干擾的情況下快速低耗的測(cè)定樣品的蛋白質(zhì)總含量。并且基于電泳界面阻滯信號(hào)概念，曹和張等進(jìn)一步解決乳品摻次的定量分析問題(專利申請(qǐng)201510140100.9)。但仍然缺少?gòu)亩ㄐ澡b定是否摻次、到甄別摻次蛋白種類、再到定量分析摻次蛋白比率的完整技術(shù)路線。造成這種狀況的原因是已有的分析技術(shù)(如PAGE、SDS-PAGE、PCR和ELISA技術(shù)等)與前沿技術(shù)(如MRB電泳滴定，專利申請(qǐng)201510140100.9)之間的銜接存在技術(shù)路線困難，傳統(tǒng)技術(shù)與前沿分析技術(shù)的整合無法實(shí)現(xiàn)上下游技術(shù)兼容。

發(fā)明內(nèi)容