[發明專利]鑒別檢測正常漿細胞和克隆性漿細胞的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201510539692.1
• 申請日: 2015-08-28
• 公開（公告）號: CN105223360B
• 公開（公告）日: 2017-03-22
• 發明（設計）人: 劉艷榮;王亞哲;常艷;郝樂;袁曉英;黃曉軍
• 申請（專利權）人: 北京大學人民醫院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/533;G01N15/14
• 代理公司: 石家莊眾志華清知識產權事務所(特殊普通合伙)13123
• 代理人: 墨偉

1.一種鑒別檢測正常漿細胞和克隆性漿細胞的試劑盒，與流式細胞儀配套使用，其特征在于所述試劑盒配備針對下述物質的單克隆抗體：IgκLightChain/IgλLightChain、CD19、CD117、CD138、CD56、CD38和CD45，并依次按照下述順序依次進行熒光素標記：FITC/PE、PE-Cy5、PE-Cy7、APC、APC-Cy7、V450和V500。

2.根據權利要求1所述的鑒別檢測正常漿細胞和克隆性漿細胞的試劑盒，其特征在于還包括固定/破膜劑和溶紅細胞液。

3.權利要求1所述的試劑盒在制備鑒別檢測正常漿細胞和克隆性漿細胞的產品中的應用，其特征在于所述應用包括：將所述試劑盒中針對CD19、CD117、CD138、CD56、CD38和CD45的單克隆抗體加入至同一個裝有骨髓標本的試管中；經溶紅細胞、破膜處理后，加入試劑盒中針對IgκLightChain/IgλLightChain的單克隆抗體，制成待測試樣；將待測試樣經流式細胞儀檢測，設門分析如下：

①建立FSC/SSC密度圖，將有核細胞區域劃為R1；對R1細胞顯示CD38/CD138散點圖，將CD38⁺CD138⁺細胞劃為R2；建立FSC/SSC散點圖只顯示R2門內細胞，將均一分布的細胞劃為R3；

②將R3門內細胞分別建立CD19/CD56、CD19/CD45和CD19/CD117二維散點圖，進一步對二維散點圖內集中分布的細胞設門，標記為R4和/或R5；

③對應CD19/CD56、CD19/CD45和CD19/CD117中R4和/或R5門內細胞分別依次建立CD45/CD117、CD56/CD117和CD45/CD56的二維散點圖；

④對應CD19/CD56、CD19/CD45和CD19/CD117中R4和/或R5門內細胞分別依次建立IgκLightChain/IgλLightChain二維點圖，分析IgκLightChain和IgλLightChain的表達及其比值。

4.根據權利要求3所述的試劑盒在制備鑒別檢測正常漿細胞和克隆性漿細胞的產品中的應用，其特征在于待測試樣的處理包括以下步驟：

①洗滌細胞：用1×PBS緩沖液充分離心洗滌骨髓標本；

②標記抗體：將洗滌后的骨髓標本與CD19-PE-Cy52.5μL，CD117-PE-Cy72.5μL，CD138-APC5uL，CD56-APC-Cy72.5μL，CD38-V4502.5μL和CD45-V5003μL混勻，室溫避光孵育10~20分鐘；

③溶紅細胞：向步驟②的體系中加入紅細胞溶解液，混勻后避光，室溫放置5~10分鐘，溶解紅細胞；

④破膜處理：1500轉/分離心8分鐘，棄上清液，加入固定/破膜劑中的細胞固定液100μL，震蕩混勻，避光孵育15min；

加入500μL1×PBS緩沖液，混勻，1500轉/分離心8分鐘，棄上清液，加入固定/破膜劑中的破膜液100μL，混勻，并同時加入10μL的IgκLightChain-FITC/IgλLightChain-PE，避光孵育15min；

⑤洗滌細胞：加入2mL含0.5vol.%~2vol.%血清和0.1wt.%NaN₃的1×PBS，混勻，1500轉/分離心8分鐘，棄上清液，加入300μL1×PBS緩沖液，混勻、待測。