[發明專利]一種檢測辣椒黃脈病毒的RT-LAMP引物及試劑盒

在審

• 申請號: 201510526746.0
• 申請日: 2015-08-25
• 公開（公告）號: CN105039600A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發明（設計）人: 湯亞飛;何自福;佘小漫;藍國兵
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種檢測辣椒黃脈病毒的RT-LAMP引物，其特征在于包括一對外側引物F3和B3以及一對內側引物FIP和BIP，其核苷酸序列如下所示：

F3:GATCACGTAACACCCGCC；

B3:GCTCTCTGATAGAGACGGCC；

FIP:GCCTCCATTTCGTCGTCTTCGA-GTTCGCCCTGTCGTTGTG；

BIP:TTGGAGGAAGGTCGAGCAACAG-AAGGTGACAGATCCTGAGGA。

2.一種辣椒黃脈病毒RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于包含權利要求1所述的RT-LAMP引物。

3.根據權利要求2所述的辣椒黃脈病毒RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：

所述的辣椒黃脈病毒RT-LAMP檢測試劑盒，包含如下組分：權利要求1所述的RT-LAMP引物；RT-LAMP反應液；酶溶液；核酸熒光染料。

4.根據權利要求3所述的辣椒黃脈病毒RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：

所述的RT-LAMP反應液包含如下組分：Tris-HCl40mM；KCl20mM；MgSO₄16mM；(NH₄)₂SO₄20mM；Tween200.2％w/w；Betaine1.6M；dNTPs每種2.8mM。

5.根據權利要求3所述的辣椒黃脈病毒RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：

所述的酶溶液為BstDNA聚合酶和AMV逆轉錄酶的混合溶液。

6.根據權利要求3所述的辣椒黃脈病毒RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：

所述的核酸熒光染料為熒光目視檢測試劑。

7.一種檢測辣椒黃脈病毒的方法，其特征在于包含如下步驟：

以待測樣品的RNA為模板，利用權利要求1所述的RT-LAMP引物或權利要求2～6任一項所述的RT-LAMP檢測試劑盒進行RT-LAMP擴增反應；反應結束后觀察RT-LAMP擴增反應溶液顏色變化，若反應液顯綠色，則判斷為陽性反應；若反應液顯橙色，則判斷為陰性反應。

8.根據權利要求7所述的檢測辣椒黃脈病毒的方法，其特征在于：

所述的RT-LAMP擴增反應的反應體系為25μL反應體系，包含如下組分：RT-LAMP反應液12.5μL，酶溶液1.0μL，40pmol/μL引物FIP1.0μL，40pmol/μL引物BIP1.0μL，10pmol/μL引物F30.5μL，10pmol/μL引物B30.5μL，核酸熒光染料1.0μL，RNA模板1.0μL，及去離子水6.5μL。

9.根據權利要求7所述的檢測辣椒黃脈病毒的方法，其特征在于：

所述的RT-LAMP擴增反應的條件為：在65℃恒溫條件下，擴增反應60min后，加熱至80℃，反應5min。

10.權利要求1所述的檢測辣椒黃脈病毒的RT-LAMP引物或權利要求2～6任一項所述的辣椒黃脈病毒RT-LAMP檢測試劑盒在植物病毒檢測領域中的應用。