[發明專利]小麥黃花葉病毒雙抗夾心生物素-親和素ELISA檢測方法及應用在審
| 申請號： | 201510522332.0 | 申請日： | 2015-08-20 |
| 公開（公告）號： | CN105137074A | 公開（公告）日： | 2015-12-09 |
| 發明（設計）人： | 任春梅;程兆榜;楊柳;繆倩;周益軍 | 申請（專利權）人： | 江蘇省農業科學院 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210014 江蘇省南京市玄武區鐘*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 小麥 花葉 病毒 夾心 生物素 親和 elisa 檢測 方法 應用 | ||
1.一種小麥黃花葉病毒雙抗夾心生物素-親和素ELISA檢測方法，包括以下步驟：
1)每孔用100uL病毒特異性抗體包被酶標板，37℃放置2h后，4℃過夜放置，洗板，甩干；
2)每孔加入200uL含10％小牛血清的磷酸鹽緩沖液，37℃孵育2h，洗板，甩干；
3)每孔分別加入100uL待檢病毒樣品、陽性和陰性樣品，37℃孵育1h，洗板，甩干；
4)每孔加入100uL生物素標記的二抗，37℃孵育1h，洗板，甩干；
5)每孔加入100uL親和素標記的酶，37℃孵育1h，洗板，甩干；
6)每孔加入100uL顯色底物，37℃孵育5～15min進行顯色反應，肉眼觀察顯色后每孔加入100uL終止液，用酶標儀測定OD值，以大于等于陰性對照OD值3倍的作物陽性結果的閾值。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟1)所述病毒特異性抗體為小麥黃花葉病毒純化單抗2D4。
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟1)中，用PH9.6的0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液將病毒特異性抗體稀釋為5～10ug/mL濃度后包被酶標板。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟1)、2)、3)、4)和5)中洗板用的洗滌液為PH7.4含0.5mol/LTween-20的磷酸鹽緩沖液。
5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟4)所述生物素標記二抗為生物素標記的小麥黃花葉病毒純化的單抗2D3，使用濃度為0.2ug/mL。
6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟5)所述親和素標記的酶為辣根過氧化物酶。
7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟6)所述顯色底物為四甲基聯苯胺。
8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟6)所述終止液為2mol/L硫酸溶液。
9.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟6)所述OD值在波長450nm下測定。
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