[發明專利]日本血吸蟲SjCTRL重組抗原蛋白及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201510519076.X
• 申請日: 2015-08-21
• 公開（公告）號: CN105153290B
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 胡薇;柴日奕;王吉鵬;徐斌;李健;張瑞祥;劉牧;辛玥;莫筱瑾;張颋
• 申請（專利權）人: 復旦大學;中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/11;C12N15/70;A61K39/00;A61P33/12
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 王函

本發明公開了一種日本血吸蟲SjCTRL重組抗原蛋白(chymotrypsin?like protease，SjCTRL)，具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的蛋白、或由該蛋白發生一個或多個氨基酸的置換、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白。此外，本發明還公開了該重組抗原蛋白的制備方法，包括日本血吸蟲胰凝乳蛋白酶樣重組蛋白的去除跨膜結構的基因序列的擴增、重組質粒的構建和鑒定、重組蛋白的誘導表達和純化等步驟；評估了該重組抗原蛋白在小鼠抗血吸蟲感染中的免疫保護力。初步探明該重組抗原蛋白可一定程度上減少感染日本血吸蟲的C57BL/6小鼠的成蟲數和肝臟蟲卵數，可作為潛在抗血吸蟲疫苗靶點。

技術領域

本發明涉及分子、細胞生物學研究領域，具體涉及日本血吸蟲胰凝乳蛋白酶樣重組抗原蛋白(chymotrypsin-like protease，SjCTRL)及其制備方法。此外，本發明還涉及該日本血吸蟲SjCTRL重組抗原蛋白的用途。

背景技術

血吸蟲病(schistosomiasis)是一種人獸共患寄生蟲病(parasitic zoonoses)，是世界上僅次于瘧疾的第二大寄生蟲病，在全球76個國家和地區流行，主要分布于亞洲，非洲和拉丁美洲，受威脅人數6億，感染人數超過2億。中國曾是受日本血吸蟲危害較嚴重的國家之一，曾流行于長江以南12個省，病人超過1200萬。在我國僅有日本血吸蟲流行，目前主要分布在以湖沼型流行區為主的江蘇、安徽、江西、湖北、湖南5省和以山丘型流行區為主的四川、云南2省。據2013年疫情數據顯示，全國血吸蟲病疫情進一步下降，但實現《全國預防控制血吸蟲病中長期規劃綱要(2004-2015年)》目標仍有一定的壓力；已達標地區的疫情尚且不穩定，還需繼續加強防治工作，并且開展更切實有效的監測。目前對于日本血吸蟲的治療還停留于化學藥物的應用，隨著抗血吸蟲藥物作用機制研究的不斷深入及分子生物學和基因技術的引入，對血吸蟲生理代謝、基因及與宿主病理生理的關系將被進一步闡明，一些血吸蟲的致死基因及薄弱代謝環節和靶分子將被發現，從而為更好地發揮藥物的藥效和減少毒副反應的發生提供理論保證。

日本血吸蟲SjCTRL一未知功能蛋白，是日本血吸蟲新的蛋白序列。本發明通過PCR擴增出日本血吸蟲SjCTRL基因，并在大腸桿菌中重組表達此基因，得到大小約為24kDa的重組蛋白，經動物保護試驗確認所得重組蛋白可一定程度上減少感染日本血吸蟲的C57BL/6小鼠的成蟲數和肝臟蟲卵數，是潛在的疫苗候選靶標，從而完成了本發明。

在本發明之前，還沒有出現涉及本發明日本血吸蟲SjCTRL重組抗原蛋白及其用于制備抗日本血吸蟲疫苗的公開報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題之一是提供一種日本血吸蟲SjCTRL重組抗原蛋白。

本發明要解決的技術問題之二是提供一對用于日本血吸蟲SjCTRL基因PCR擴增的特異性引物。

本發明要解決的技術問題之三是提供該日本血吸蟲SjCTRL重組抗原蛋白的制備方法。

本發明要解決的技術問題之四是提供該日本血吸蟲SjCTRL重組抗原蛋白在制備抗日本血吸蟲疫苗中的應用。

本發明從日本血吸蟲全基因組數據庫中篩選到一個新的與已報道的曼氏血吸蟲絲氨酸蛋白酶SmSP5(GeneBank登錄號AHI46409.1)核苷酸序列相似性為79％，蛋白序列相似性有72％的日本血吸蟲絲氨酸蛋白酶基因，經注釋命名為日本血吸蟲胰凝乳蛋白酶樣蛋白基因(S.japonicum chymotrypsin-like protease，簡稱SjCTRL基因)。SmSP5蛋白在吸蟲綱絲氨酸蛋白S1家族系統進化樹中處于一個新的分支，該分支介于血吸蟲的尾蚴彈性蛋白酶和S1其他家族的胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶之間，且并沒有相關的文獻報道其可作為抗曼氏血吸蟲的潛在疫苗靶點。