[發明專利]一種生產酵母發酵態鋅硒復合飼料添加劑的方法

有效

• 申請號: 201510516531.0
• 申請日: 2015-08-21
• 公開（公告）號: CN105010761B
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 何萬領;李曉麗;張金漢
• 申請（專利權）人: 河南艾格多科技有限公司
• 主分類號: C12P1/02
• 分類號: C12P1/02;C12N1/18;C12N1/16;A23K10/12;A23K40/00
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 羅民健

1.一種生產酵母發酵態鋅硒復合飼料添加劑的方法，所用的發酵菌種為市售的啤酒酵母和產朊假絲酵母，所用的鋅源為無機鋅鹽，硒源為亞硒酸鈉，其特征在于：包括如下步驟：

（1）培養基制備以及微生物培養

取葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸膏10g、瓊脂20g，用蒸餾水溶解、定容至1000mL，用高壓鍋在121℃滅菌20min-30min，調pH至5.0~5.5，制得培養基，然后將啤酒酵母和產朊假絲酵母從冰箱取出復蘇，培養于該培養基上24h，以獲得復活的啤酒酵母和產朊假絲酵母；

（2）基礎液體培養基與梯度培養基制備

基礎液體培養基的制法為：依次向1000ml蒸餾水中加入葡萄糖20g、蛋白胨20g以及酵母浸膏10g，并攪拌混勻，調整pH至5.0~5.2，備用；

梯度培養基的制法為：在上述基礎液體培養基中分別加入鋅源和硒源，進而得到鋅含量分別為50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、800mg/L、1000mg/L和1200mg/L的鋅培養基以及硒含量分別為0.5mg/L、1mg/L、2.5mg/L、5mg/L、8mg/L、10mg/L、15mg/L的硒培養基，鋅培養基和鋅含量為0mg/L的基礎液體培養基構成鋅梯度培養基，硒培養基和硒含量為0mg/L的基礎液體培養基構成硒梯度培養基，備用；

（3）微生物梯度培養

將步驟（1）處理所獲得的啤酒酵母和產朊假絲酵母分別依次培養于步驟（2）所制得的鋅梯度培養基上，培養時間為24h，培養溫度為30.5℃，培養結束后，再分別依次培養于步驟（2）所制得的硒梯度培養基上，培養時間為24h，培養溫度為30.5℃；

（4）種子培養基的制備

獲取啤酒生產過程中新鮮的糖化廢液，在4000r/min轉速下離心5~10min，然后按照重量比添加3.5%的蔗糖、0.3%的尿素、0.25%的食鹽、0.02%的硫化鈉，混勻后121℃滅菌15~20min，并調pH至5.0~5.5，即制成種子培養基，并將其平均分做兩份，備用；

（5）發酵種子的制備

將經過步驟（3）處理的啤酒酵母和產朊假絲酵母按照10%的接種比例分別接種于步驟（4）所制備的兩份種子培養基中，一份種子培養基上接種一種酵母菌，將接種后的培養基放置于30.5℃的恒溫培養箱內培養24h，即獲得啤酒酵母發酵種子和產朊假絲酵母發酵種子；

（6）發酵液的制備

發酵液是利用啤酒生產過程中的糖化廢液或發酵廢液制成的，具體制備方法如下：

a、利用糖化廢液制作發酵液：取啤酒生產過程中新鮮的糖化廢液，在3500~4000r/min轉速下離心5~10min，然后按照重量比依次加入1.0%的蔗糖、20%的玉米面、0.3%的尿素、0.25%的食鹽以及0.02%的硫化鈉，并于121℃滅菌15~20min，調整pH至5.0~5.5，即可制成發酵液；

b、利用發酵廢液制作發酵液：取啤酒生產過程中新鮮的發酵廢液，在3500~4000r/min轉速下離心5~10min，再在60~65℃水浴鍋內水浴加熱30~40min，加熱期間不斷用滅菌的玻璃棒攪拌，使發酵廢液中殘留的乙醇揮發，同時達到滅菌效果，然后按照重量比，向滅菌后的發酵廢液中加入 2.0%的蔗糖、20%的玉米面、0.5%的尿素、0.25%的食鹽以及0.02%的硫化鈉，并調整pH至5.0~5.5，即可制成發酵液；

（7）微生物發酵

將待發酵的無機鋅鹽和亞硒酸鈉按照重量分別取其中的20%加入步驟（6）所制得的發酵液中并混合均勻，再按照10%的接種比例向發酵液中分別接種由步驟（5）所制備的啤酒酵母發酵種子和產朊假絲酵母發酵種子，然后于30.5℃條件下進行發酵，發酵2h后，向發酵液中再次加入20%的待發酵的無機鋅鹽和亞硒酸鈉，攪拌均勻，繼續發酵至6h后，向發酵液中再次加入20%的待發酵的無機鋅鹽和亞硒酸鈉，攪拌均勻，繼續發酵至12h后，將剩余的40%的待發酵的無機鋅鹽和亞硒酸鈉加入發酵液中，攪拌均勻，使發酵液中的鋅含量達到1400mg/L、硒含量達到20 mg/L，繼續發酵至24h后，完成發酵過程；

（8）酵母發酵態鋅硒復合飼料添加劑的制作

將步驟（7）所得的發酵產物進行過濾，收取固體物，所得濾液在3500~4000r/min條件下離心10min，獲得固體沉淀物，然后將過濾所得的固體物和離心所得的固體沉淀物混合均勻，置于65℃電熱恒溫干燥箱內進行干燥處理，干燥后用粉碎機將其粉碎并過60目篩，從而獲得酵母發酵態鋅硒復合飼料添加劑；

（9）包裝

以1000g為單位，將步驟（8）所獲得的酵母發酵態鋅硒復合飼料添加劑用復合薄膜進行真空包裝，真空度為0.085~0.095Mpa。