[發明專利]構建體、轉基因淋巴細胞及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201510516475.0
• 申請日: 2015-08-20
• 公開（公告）號: CN106467906B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 嚴勇朝;苑錫銅;朱益林;陳思毅
• 申請（專利權）人: 北京馬力喏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;A61K48/00;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

本發明提出了一種構建體、一種轉基因淋巴細胞及其制備方法和用途，所述轉基因淋巴細胞表達功能性免疫共刺激分子和嵌合抗原受體(CAR)，所述構建體包含第一核酸分子，所述第一核酸分子編碼功能性免疫共刺激分子；以及第二核酸分子，所述第二核酸分子編碼嵌合抗原受體。本發明提出的轉基因淋巴細胞在腫瘤病人體內的生存能力大大提高，對腫瘤細胞的定向殺傷作用更強。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體地，本發明涉及一種T淋巴細胞、一種逆轉錄病毒、一種轉基因淋巴細胞、一種構建體、一種制備轉基因淋巴細胞的方法、一種用于治療癌癥的治療組合物和一種提高淋巴細胞活性的方法。

背景技術

過繼T細胞療法是來自體內的T細胞的活化、擴增,和隨后的應用。一些T細胞遷移到腫瘤位點,直接溶解腫瘤細胞。經體外適當處理的T細胞在間接體內療法中有能力引起顯著的治療效果。

然而,使用腫瘤浸潤淋巴細胞的過繼T細胞療法仍有待改進。

免疫共刺激是激活有效的T細胞抗腫瘤反應所必須的。免疫共刺激分子可分為兩個重要的家族:B7/CD28家族和腫瘤壞死因子(TNF)家族，后者包括4-1BB,OX-40、CD27和CD30分子,這些分子已被證明可正向調控和增強細胞免疫應答。4-1BB(CD137，TNFRSF9)是一個30-kDa的糖蛋白質,可瞬時表達于各種白細胞，包括激活的T細胞和自然殺傷(NK)細胞。它的配位體,4-1BBL(CD137L),主要表達于各種抗原遞呈細胞，如B細胞、DCs和巨噬細胞。此外,4-1BBL也被發現于淋巴瘤,結腸癌、肉瘤和黑素瘤等實體瘤中。

基于上述免疫共刺激分子的研究現狀，免疫共刺激分子在T細胞抗腫瘤反應中的應用有待進一步開發。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。

本發明是基于發明人的下列發現而完成的：

現有的經體外適當處理的T細胞通常不能有效的抑制癌癥患者腫瘤的生長,這是由于腫瘤反應性細胞毒性T細胞的數量不足，以及腫瘤微環境中的免疫抑制機制的抵抗作用。使用抗CD19的嵌合抗原受體過繼T細胞療法，在某些B細胞淋巴瘤患者中有顯著的效果，但相當部分的B細胞淋巴瘤患者沒有反應。本發明針對上述問題，提出了一種攜帶編碼全長的功能性免疫共刺激分子和嵌合抗原受體序列的構建體和以此構建體導入后形成的轉基因淋巴細胞，本發明提出的構建體和轉基因淋巴細胞用于過繼T細胞的免疫治療，可以大大提高T細胞在腫瘤中的存活率，顯著提高T細胞的抗腫瘤效果，尤其對造血系統惡性腫瘤和淋巴瘤有顯著療效。

在本發明的第一方面，本發明提出了一種T淋巴細胞，根據本發明的是實施例，所述T淋巴細胞表達：4-1BB；以及嵌合抗原受體，其中，所述嵌合抗原受體包括：胞外區，所述胞外區包括單鏈抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區，所述單鏈抗體特異性識別抗原CD19；跨膜區，所述跨膜區與所述胞外區相連，并且嵌入到所述T淋巴細胞的細胞膜中；以及胞內區，所述胞內區與所述跨膜區相連，并且所述胞內區包括CD28的胞內段以及CD3ζ鏈。根據本發明的實施例，本發明的T淋巴細胞在腫瘤中的存活率大大提高，對腫瘤的殺傷效果顯著提高，尤其對造血系統惡性腫瘤和淋巴瘤有顯著療效。