[發明專利]構建體、轉基因淋巴細胞及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201510516475.0
• 申請日: 2015-08-20
• 公開（公告）號: CN106467906B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 嚴勇朝;苑錫銅;朱益林;陳思毅
• 申請（專利權）人: 北京馬力喏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;A61K48/00;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種T淋巴細胞，其特征在于，所述T淋巴細胞表達：

4-1BB全長；以及

嵌合抗原受體，其中，

所述嵌合抗原受體包括：

胞外區，所述胞外區包括單鏈抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區，所述單鏈抗體特異性識別抗原CD19；

跨膜區，所述跨膜區與所述胞外區相連，并且嵌入到所述T淋巴細胞的細胞膜中；以及

胞內區，所述胞內區與所述跨膜區相連，并且所述胞內區包括CD28的胞內段以及CD3ζ鏈。

2.一種逆轉錄病毒，其特征在于，所述逆轉錄病毒攜帶編碼下列蛋白的核酸分子：

全長4-1BB，所述全長4-1BB具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；

嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

3.一種逆轉錄病毒，其特征在于，所述逆轉錄病毒攜帶含有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

4.一種轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述淋巴細胞表達：

功能性免疫共刺激分子；以及

嵌合抗原受體，

所述嵌合抗原受體包括：

胞外區，所述胞外區能夠與抗原特異性結合；

跨膜區；以及

胞內區，所述胞內區包括免疫共刺激分子胞內段；

所述抗原是腫瘤抗原CD19；

所述胞外區包括抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區，所述抗體結合所述抗原CD19；所述抗體為單鏈抗體；

所述功能性免疫共刺激分子包括全長的4-1BB，所述免疫共刺激分子胞內段為CD28或者4-1BB胞內段。

5.根據權利要求4所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述淋巴細胞是CD3+T淋巴細胞。

6.根據權利要求5所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述淋巴細胞是自然殺傷細胞。

7.根據權利要求6所述的轉基因淋巴細胞，其特征在于，所述淋巴細胞是自然殺傷T細胞。

8.一種構建體，其特征在于，所述構建體包括：

第一核酸分子，所述第一核酸分子編碼功能性免疫共刺激分子；以及

第二核酸分子，所述第二核酸分子編碼嵌合抗原受體，

其中，所述功能性免疫共刺激分子和所述嵌合抗原受體是如權利要求4中所定義的。

9.根據權利要求8所述的構建體，其特征在于所述第一核酸分子與所述第二核酸分子被設置為在權利要求4～7任一項所述的淋巴細胞中表達所述功能性免疫共刺激分子與所述嵌合抗原受體，并且所述功能性免疫共刺激分子與所述嵌合抗原受體呈非融合形式。

10.根據權利要求9所述的構建體，其特征在于，進一步包括：

內部核糖體進入位點序列，所述內部核糖體進入位點序列設置在所述第一核酸分子與所述第二核酸分子之間，所述內部核糖體進入位點具有SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。

11.根據權利要求8所述的構建體，其特征在于，進一步包括：

第三核酸分子，設置在所述第一核酸分子與所述第二核酸分子之間，并且所述第三核酸分子編碼連接肽，所述連接肽能夠在所述淋巴細胞中被切割。

12.根據權利要求11所述的構建體，其特征在于，所述連接肽具有SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。

13.根據權利要求8所述的構建體，其特征在于，進一步包括：

第一啟動子，所述第一啟動子與所述第一核酸分子可操作地連接；以及

第二啟動子，所述第二啟動子與所述第二核酸分子可操作地連接。