[發(fā)明專利]一種利用啤酒廢液生產(chǎn)酵母發(fā)酵態(tài)鐵飼料添加劑的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510515659.5
• 申請日: 2015-08-21
• 公開（公告）號: CN105146100B
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何萬領(lǐng);李曉麗;張寶榮
• 申請（專利權(quán)）人: 河南艾格多科技有限公司
• 主分類號: C12P1/02
• 分類號: C12P1/02;C12N1/18;C12N1/16;A23K10/12;A23K10/38;A23K40/10
• 代理公司: 洛陽公信知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 羅民健

1.一種利用啤酒廢液生產(chǎn)酵母發(fā)酵態(tài)鐵飼料添加劑的方法，所用的發(fā)酵菌種為啤酒酵母和產(chǎn)朊假絲酵母，所用的鐵為可溶解在稀酸溶液中的無機鐵化合物，其特征在于：包括如下步驟：

（1）培養(yǎng)基制備以及微生物培養(yǎng)

取葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸膏10g、瓊脂20g，用蒸餾水溶解、定容至1000mL，用高壓鍋在121℃滅菌20min-30min，調(diào)pH至5.0~5.5，制得培養(yǎng)基，然后將啤酒酵母和產(chǎn)朊假絲酵母從冰箱取出復(fù)蘇，培養(yǎng)于該培養(yǎng)基上24h，以獲得復(fù)活的啤酒酵母和產(chǎn)朊假絲酵母；

（2）基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基與鐵梯度培養(yǎng)基制備

基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基的制法為：依次向1000ml蒸餾水中加入葡萄糖20g、蛋白胨20g以及酵母浸膏10g，并攪拌混勻，調(diào)整pH至5.0~5.2，備用；

鐵梯度培養(yǎng)基的制法為：在上述基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基中加入可溶解在稀酸溶液中的無機鐵化合物，得到鐵含量分別為50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L和1000mg/L的培養(yǎng)基，并與鐵含量為0mg/L的基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基構(gòu)成鐵梯度培養(yǎng)基，備用；

（3）微生物梯度培養(yǎng)

將步驟（1）處理所獲得的啤酒酵母和產(chǎn)朊假絲酵母分別依次培養(yǎng)于步驟（2）所制得鐵梯度培養(yǎng)基中，培養(yǎng)時間為24h，培養(yǎng)溫度為30.5℃；

（4）種子培養(yǎng)基的制備

獲取啤酒生產(chǎn)過程中新鮮的糖化廢液，在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5~10min，然后按照重量比添加3.5%的蔗糖、0.3%的尿素、0.25%的食鹽、0.02%的硫化鈉，混勻后121℃滅菌15~20min，并調(diào)pH至5.0~5.5，即制成種子培養(yǎng)基，并將其平均分做兩份，備用；

（5）發(fā)酵種子的制備

將經(jīng)過步驟（3）處理的啤酒酵母和產(chǎn)朊假絲酵母按照10%的接種比例分別接種于步驟（4）所制備的兩份種子培養(yǎng)基中，一份種子培養(yǎng)基接種一種酵母菌，然后將接種后的培養(yǎng)基放置于30.5℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，即獲得啤酒酵母發(fā)酵種子和產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵種子；

（6）發(fā)酵液的制備

發(fā)酵液是利用啤酒生產(chǎn)過程中的糖化廢液或發(fā)酵廢液制成的，具體制備方法如下：

a、利用糖化廢液制作發(fā)酵液：取啤酒生產(chǎn)過程中新鮮的糖化廢液，在3500~4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5~10min，然后按照重量比依次加入1.0%的蔗糖、20%的玉米面、0.3%的尿素、0.25%的食鹽以及0.02%的硫化鈉，并于121℃滅菌15~20min，調(diào)整pH至5.0~5.5，即可制成發(fā)酵液；

b、利用發(fā)酵廢液制作發(fā)酵液：取啤酒生產(chǎn)過程中新鮮的發(fā)酵廢液，在3500~4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5~10min，再在60~65℃水浴鍋內(nèi)水浴加熱30~40min，加熱期間不斷用滅菌的玻璃棒攪拌，使發(fā)酵廢液中殘留的乙醇揮發(fā)，同時達到滅菌效果，然后按照重量比，向滅菌后的發(fā)酵廢液中加入 2.0%的蔗糖、20%的玉米面、0.5%的尿素、0.25%的食鹽以及0.02%的硫化鈉，并調(diào)整pH至5.0~5.5，即可制成發(fā)酵液；

（7）微生物發(fā)酵

將待發(fā)酵的無機鐵化合物按照重量取其中的20%混合在步驟（6）所制得發(fā)酵液中，置于發(fā)酵容器內(nèi)，并按照10%的接種比例向發(fā)酵容器內(nèi)的發(fā)酵液中接種步驟（5）所制得的啤酒酵母發(fā)酵種子和產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵種子，然后調(diào)節(jié)溫度至30.5℃進行發(fā)酵，2h后，向發(fā)酵容器內(nèi)再次加入20%的待發(fā)酵的無機鐵化合物，并攪拌均勻，再繼續(xù)發(fā)酵至6h后，再次加入20%的待發(fā)酵的無機鐵化合物，攪拌均勻，使發(fā)酵培養(yǎng)基中鐵含量達到1200mg/L，繼續(xù)發(fā)酵至12h后，加入剩余的40%的待發(fā)酵的無機鐵化合物，攪拌均勻，繼續(xù)發(fā)酵24h，即合計發(fā)酵時間36h后，完成發(fā)酵過程；

（8）酵母發(fā)酵態(tài)鐵飼料添加劑的制作

將步驟（7）所得的發(fā)酵產(chǎn)物進行過濾，收取固體物，所得濾液在3500~4000r/min條件下離心10min，獲得固體沉淀物，然后將過濾所得的固體物和離心所得的固體沉淀物混合均勻，置于65℃電熱恒溫干燥箱內(nèi)進行干燥處理，干燥后用粉碎機將其粉碎并過60目篩，從而獲得酵母發(fā)酵態(tài)鐵飼料添加劑；

（9）包裝

以1000g為單位，將步驟（8）所獲得的酵母發(fā)酵態(tài)鐵飼料添加劑用復(fù)合薄膜進行真空包裝，真空度為0.085~0.095Mpa。