[發明專利]鄰苯二甲酸二乙酯人工免疫原及其制備和用途

在審

• 申請號: 201510515134.1
• 申請日: 2015-08-20
• 公開（公告）號: CN105085663A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 莊惠生;孫瑞艷
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/10;G01N33/53
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中;陳少凌

技術領域

本發明涉及一種鄰苯二甲酸二乙酯人工免疫原DEP-BSA及其制備和用途，具體涉及的是一種用于新興持久性有機污染物——鄰苯二甲酸二乙酯免疫檢測的鄰苯二甲酸二乙酯人工免疫原DEP-BSA及其制備方法和用途。

背景技術

鄰苯二甲酸酯類塑化劑(縮寫為PAEs)，又稱酞酸酯類，是一類由鄰苯二甲酸與含有4-15個碳的醇發生費歇爾(Fischer)酯化反應所形成的酯的重要衍生物的統稱。這類物質有特殊性氣味，毒性較大，一般情況下狀態為粘稠液體；液態條件下溫度范圍寬，流動性大，揮發性低，不溶于水，易溶于大多數有機溶劑。這類物質用途廣泛，它不僅可作為食品包裝材料、玩具、農藥載體、驅蟲劑、潤滑劑、乙烯地板和壁紙、去泡劑、清潔劑、醫用材料(如人工心臟瓣膜等人工器官、血袋、注射器和膠管)和個人護理用品(主要有化妝品、香味品、指甲油、頭發噴霧劑、香皂和洗發液)等近千種產品的生產原材料，還常作為塑料增塑劑被用于改造塑料制品性能。

其中，鄰苯二甲酸二乙酯(英文名稱：Diethylphthalate，簡稱DEP)，又名酞酸二乙酯，CAS號為84-66-2，分子式為C₁₂H₁₄O₄，分子量為222.24，無色至微黃色澄清油狀液體，極易溶解于乙醇，幾乎不溶于水；遇明火、高熱可燃燒，具有刺激性。該物質低毒，對皮膚、眼睛、上呼吸道有刺激作用；經皮膚吸收或攝入后可引起頭痛、頭暈和嘔吐；具潛在的光毒性、輕度致敏；對女性子宮有影響，可能導致胎兒畸形或死亡^]。由于它能與大多數樹脂的相容性比較好，因此，它主要作為樹脂的增塑劑而廣泛應用；此外，還可作為潤滑劑、起泡劑、香水及藥用包衣材料的輔料。近些年來，有研究學者發現該物質在食品(如：酒、飲料等)中的含量過高從而危及食品安全，因此便備受人們關注。

目前，關于鄰苯二甲酸二乙酯的研究主要集中在水體、沉積物、大氣等環境領域和生物體的毒性方面，但樣品的檢測方法方面研究較少。目前對鄰苯二甲酸二乙酯的檢測手段主要為氣相色譜和高效液相色譜等儀器檢測方法，這些方法雖然準確可靠，但對樣品的預處理方法和操作人員的專業性有很高的要求。正因為這些方法的處理復雜、耗時、儀器價格昂貴而不適合推廣使用，也不利于在環境污染事故現場快速檢測。為克服這些缺點，尋求一種快速、簡便、靈敏且經濟實用的分析方法就成為環境監測領域的主要研究方向。

20世紀60年代發展起來的免疫分析(Immunoassay,IA)是基于抗原和抗體的特異性、可逆性結合反應的分析技術。免疫分析具有常規理化分析技術無可比擬的選擇性和高靈敏性，非常適合復雜介質中痕量組分的分析。因此免疫分析具有的特異性強、靈敏度高、方法快捷簡單、分析通量大、檢測成本低等優點，使得該類方法可以滿足簡單、快速、靈敏地檢測持久性有機污染物的要求。1971年Engvail,VanWeerman等報道了檢測體液中微量物質的固相免疫分析技術，即酶聯免疫吸附分析法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。目前，ELISA方法已經成為免疫分析方法中重要的組成部分。ELISA方法是將抗原-抗體之間的免疫反應與酶的高效催化特性有機結合而發展起來的一種免疫分析方法。其中，以親和素-生物素信號放大系統為基礎的親和素-生物素化酶聯免疫吸附分析法，以生物素標記抗體(抗原)，并以酶標親和素代替ELISA方法中酶標抗體。親和素是卵白蛋白中的一種堿性糖蛋白，分子量約為68kDa。一個親和素分子由4個亞單位組成，每個亞單位都可以與一個生物素分子(分子量為244)特異性結合。生物素與親和素結合特異性強，其親和力比抗原抗體反應大得多，親和常數高達1015M^-1。由于一個親和素能與4個生物素分子結合，因此在檢測中可提高被固相結合酶的數量，進而提高檢測方法的靈敏度。

現有技術中，一篇名為“環境激素鄰苯二甲酸二甲酯(二乙酯)的熒光免疫分析新方法研究”的碩士論文中公開了一種鄰苯二甲酸二乙酯的熒光免疫分析方法，但該方法中免疫原制備方法粗糙，不易重復出來。

目前尚沒有親和素-生物素化酶聯免疫吸附分析法檢測鄰苯二甲酸二乙酯的相關報道。而制備合格的DEP人工免疫原是生物免疫得到高特異性抗DEP抗體的前提，更是建立DEP免疫檢測分析方法的關鍵，這將具有重要的應用價值和理論研究意義。

發明內容