[發(fā)明專利]鄰苯二甲酸二乙酯人工免疫原及其制備和用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510515134.1
• 申請(qǐng)日: 2015-08-20
• 公開（公告）號(hào): CN105085663A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 莊惠生;孫瑞艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/765
• 分類號(hào): C07K14/765;C07K1/10;G01N33/53
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中;陳少凌

1.一種鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA，其特征在于，結(jié)構(gòu)式如式(I)所示：

2.一種如權(quán)利要求1所述的鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

采用重氮化法將DEP半抗原與蛋白質(zhì)分子BSA偶聯(lián)制備人工免疫原DEP-BSA。

3.如權(quán)利要求2所述的鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA的制備方法，其特征在于，所述DEP半抗原的制備方法包括如下步驟：

A1、在強(qiáng)酸性介質(zhì)a存在的條件下，4-硝基鄰苯二甲酸與乙醇發(fā)生酯化反應(yīng)，生成4-硝基鄰苯二甲酸二乙酯；

A2、在非質(zhì)子性有機(jī)溶劑存在的條件下，所述4-硝基鄰苯二甲酸二乙酯和鋅粉、強(qiáng)酸b發(fā)生還原反應(yīng)，生成鄰苯二甲酸二乙酯半抗原。

4.如權(quán)利要求3所述的鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA的制備方法，其特征在于，所述步驟A1中，4-硝基鄰苯二甲酸、乙醇、強(qiáng)酸性介質(zhì)a的摩爾比為1:(5～7):(0.6～0.8)，反應(yīng)液a的溫度為86～90℃，酯化反應(yīng)時(shí)間為8～10小時(shí)；所述步驟A2中，4-硝基鄰苯二甲酸二乙酯、非質(zhì)子性有機(jī)溶劑a、強(qiáng)酸b和鋅粉的摩爾比為1:(550～580):(20～22):(18～20)，反應(yīng)液b的溫度為25～35℃，還原反應(yīng)時(shí)間為10～12小時(shí)；所述強(qiáng)酸性介質(zhì)a和強(qiáng)酸b獨(dú)立地選自濃鹽酸、濃硫酸或濃硝酸中的一種，所述非質(zhì)子性有機(jī)溶劑選自苯或甲苯。

5.如權(quán)利要求2所述的鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA的制備方法，其特征在于，所述采用重氮化法將DEP半抗原與蛋白質(zhì)分子BSA偶聯(lián)制備人工免疫原DEP-BSA具體包括以下步驟：

B、將DEP半抗原溶于強(qiáng)酸c中，形成DEP半抗原溶液；向DEP半抗原溶液中加入亞硝酸鈉溶液，反應(yīng)，生成重氮鹽溶液；

C、將牛血清蛋白BSA溶于硼酸鈉緩沖液中，形成牛血清蛋白溶液；

D、向所述重氮鹽溶液中加入牛血清蛋白溶液形成反應(yīng)液，攪拌反應(yīng)。

6.如權(quán)利要求5所述的鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA的制備方法，其特征在于，步驟B中，所述DEP半抗原、強(qiáng)酸c、亞硝酸鈉、牛血清蛋白BSA的摩爾比為1:3～4:8～10:0.001～0.01；所述強(qiáng)酸c為濃鹽酸、濃硫酸或濃硝酸中的一種。

7.如權(quán)利要求5所述的鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA的制備方法，其特征在于，步驟B的反應(yīng)過程還包括用pH試紙控制反應(yīng)酸度為2.0-3.0，反應(yīng)結(jié)束后加尿素去除未反應(yīng)的亞硝酸鈉；所述DEP半抗原與尿素的摩爾比為1：300～320。

8.如權(quán)利要求5所述的鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA的制備方法，其特征在于，步驟D中，所述攪拌時(shí)間為2～4小時(shí)。

9.如權(quán)利要求5所述的鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA的制備方法，其特征在于，所述步驟還包括步驟D的反應(yīng)結(jié)束后，離心分離反應(yīng)液，取上清液透析，離心分離，得純化后的鄰苯二甲酸二乙酯人工免疫原DEP-BSA。

10.一種如權(quán)利要求1所述的鄰苯二甲酸二乙酯的人工免疫原DEP-BSA的用途，其特征在于，用于痕量塑化劑鄰苯二甲酸二乙酯的檢測(cè)。