[發(fā)明專利]一種小叢紅景天的離體培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510514981.6
• 申請(qǐng)日: 2015-08-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105191790B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王俊麗;費(fèi)良丹;張榮榮;黃婧婧;郭萌;彭耀;張一鳴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中央民族大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 關(guān)暢,張立娜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，涉及一種小叢紅景天的離體培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

小叢紅景天Rhodiola dumulosa(Franch.)S.H.Fu，又名鳳尾七，為景天科多年生草本植物。產(chǎn)于四川西北部、青海、甘肅、陜西、湖北、山西、河北、內(nèi)蒙古、吉林，生于海拔1600-3900米的山坡石上。

小叢紅景天為藏族名貴藥材，又名“掃羅瑪爾布”，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實(shí)：小叢紅景天具有類似中醫(yī)“扶正固本”的“適應(yīng)原樣”作用，即促使由不同病因引起的病態(tài)指標(biāo)向正常狀態(tài)轉(zhuǎn)變的特殊調(diào)節(jié)功能。其滋補(bǔ)、強(qiáng)身、防病和抗衰老作用是已知補(bǔ)益藥中罕見(jiàn)的。小叢紅景天的增強(qiáng)免疫功能的作用優(yōu)于人參，是比人參還珍貴的純綠色藥用植物。根頸藥用，有補(bǔ)腎、養(yǎng)心安神、調(diào)經(jīng)活血、明目之效。

目前關(guān)于小叢紅景天的組織培養(yǎng)尚未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種小叢紅景天的離體培養(yǎng)方法。

本發(fā)明所提供的小叢紅景天的離體培養(yǎng)方法，具體可包括如下步驟：

(1)將小叢紅景天的莖段接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到愈傷組織；

(2)將步驟(1)所得愈傷組織接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到不定芽；

(3)將步驟(2)所得不定芽接種于不定芽增殖培養(yǎng)基上，進(jìn)行不定芽增殖培養(yǎng)，得到叢生芽；

(4)將步驟(3)所得叢生芽接種于生根培養(yǎng)基上，進(jìn)行生根培養(yǎng)，得到再生苗。

所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在MS固體培養(yǎng)基中加入6-BA、NAA和2,4-D后得到的培養(yǎng)基；所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中6-BA的終濃度為1.0-1.5mg/L、NAA的終濃度為0.2-0.5mg/L、2,4-D的終濃度為0.2-0.5mg/L；pH5.8。

所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是如下(a1)或(a2)所示培養(yǎng)基：

(a1)在MS固體培養(yǎng)基中加入6-BA和NAA后得到的培養(yǎng)基；所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中6-BA的終濃度為0.5-1.0mg/L、NAA的終濃度為0.1-0.5mg/L；pH 5.8；

(a2)在MS固體培養(yǎng)基中加入TDZ和NAA后得到的培養(yǎng)基；所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中TDZ的終濃度為0.5-1.0mg/L、NAA的終濃度為0.5-1.0mg/L；pH5.8。

所述不定芽增殖培養(yǎng)基是在MS固體培養(yǎng)基中加入TDZ后得到的培養(yǎng)基；所述不定芽增殖培養(yǎng)基中TDZ的終濃度為0.5-2.0mg/L；pH5.8。

所述生根培養(yǎng)基是在MS固體培養(yǎng)基中加入IBA后得到的培養(yǎng)基；所述生根培養(yǎng)基中IBA的終濃度為1.0-2.0mg/L；pH5.8。

進(jìn)一步，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中6-BA的終濃度具體為0.85mg/L、NAA的終濃度具體為0.34mg/L、2,4-D的終濃度具體為0.33mg/L；所述不定芽增殖培養(yǎng)基中TDZ的終濃度具體為0.5-1.0mg/L，如0.5mg/L；所述生根培養(yǎng)基中IBA的終濃度具體為1.0mg/L。

其中，所述MS固體培養(yǎng)基中的碳源為蔗糖；所述MS固體培養(yǎng)基中的凝膠劑為瓊脂。所述蔗糖在所述MS固體培養(yǎng)基中的終濃度具體為30g/L；所述瓊脂在所述MS固體培養(yǎng)基中的終濃度具體為7g/L。

在所述方法中，步驟(1)中進(jìn)行所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件、步驟(2)中進(jìn)行所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件、步驟(3)中進(jìn)行所述不定芽增殖培養(yǎng)的條件，以及步驟(4)中進(jìn)行所述生根培養(yǎng)的條件，均可為：溫度25±2℃、光照時(shí)間12h/天、光照強(qiáng)度30～40mmol·m^-2·s^-1。

另外，步驟(1)中進(jìn)行所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)的周期、步驟(2)中進(jìn)行所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的周期、步驟(3)中進(jìn)行所述不定芽增殖培養(yǎng)的周期，以及步驟(4)中進(jìn)行所述生根培養(yǎng)的周期均為35天。

在上述方法的步驟(1)中，所述小叢紅景天的莖段為消毒后的莖段；所述消毒具體可為：將待消毒的小叢紅景天的莖段用流水沖洗20分鐘，將沖洗過(guò)的莖段用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒10s，用無(wú)菌水沖洗(如沖洗3次)，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的升汞水溶液消毒2min，最后用無(wú)菌水沖洗(如沖洗3-5次)。

在上述方法中，還可包括將所述再生苗進(jìn)行煉苗和移栽的步驟。具體為：先將所述再生苗在無(wú)菌室煉苗1周后，洗凈根部的培養(yǎng)基，然后移栽至泥炭土：珍珠巖：沙＝4：3：2(體積比)的混合基質(zhì)中，置于空氣相對(duì)濕度為80％–90％、溫度為20℃的環(huán)境中，每天澆水2次。