[發明專利]一種金槍魚眼透明質酸的提取方法

有效

• 申請號: 201510510730.0
• 申請日: 2015-08-19
• 公開（公告）號: CN105131150B
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發明（設計）人: 應國清;王婧茜;陳建澍;易喻;梅建鳳;張彥璐;龔海平
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學;浙江海博食品有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司33201
• 代理人: 黃美娟,李世玉

(一)技術領域

本發明涉及一種利用金槍魚眼為原料制備透明質酸的方法。

(二)背景技術

透明質酸((hyaluronic acid，HA)，又名玻尿酸，是一種由葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖胺交替連接而成的酸性粘多糖。它大量存在于人體皮膚及關節等部位，研究證實，皮膚中的透明質酸有助于保持水分及皮膚彈性，使皮膚顯得水潤緊致。不僅如此，透明質酸還和創傷愈合、皮膚細胞的增生和移動等多種皮膚生理活動有關。此外，在關節部位，透明質酸還擔負著覆蓋和保護關節組織、保持關節活動靈活柔滑、緩沖等機能。目前，透明質酸作為一種可吸收、降解的生物材料，已廣泛應用于臨床醫學和高級化妝品生產，表現出良好的市場潛力和應用前景。

我國海岸線長，海洋魚類資源豐富，其中金槍魚由于資源儲量豐富，產量也在過去的幾十年中一直迅猛增長。金槍魚的主要用于制作生魚片和金槍魚罐頭，在加工生產過程中，魚頭作為副產品被廢棄，少量被加工成廉價的飼料，這不但造成資源的浪費，而且污染環境，還在一定程度上增加了產品的成本，這就為或獲得大量廉價易得的眼球提供了可能。金槍魚眼主要由玻璃體構成，透明質酸含量高，易于收集，而且是天然透明質酸。因此，本發明以金槍魚魚眼為原料，進行HA的提取利用，提高了金槍魚原料的利用率和生產企業的經濟效益。

(三)發明內容

本發明的目的在于提供金槍魚眼透明質酸的提取方法，提高金槍魚眼透明質酸的提取率，促進其經濟效益的提升。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一種金槍魚眼透明質酸的提取方法，所述方法包括如下步驟：

(1)從金槍魚切片后的廢棄部分中剝出金槍魚眼玻璃體，并進行脫脂處理，然后干燥、粉碎，獲得魚眼干粉；

(2)由于透明質酸極易溶于水，因此直接采用蒸餾水浸提法，將步驟(1)獲得的魚眼干粉浸沒于蒸餾水中，25℃～35℃浸提1～4h，將浸提液離心，獲得上清液；

(3)將步驟(2)上清液與木瓜蛋白酶混合后注入截留分子量為5000-100000Da(優選50000Da)的酶膜反應器，在溫度為40℃-70℃、壓力0.05MPa-0.3MPa、溶液pH為5.0-8.0的條件下反應，取截留液；

(4)將步驟(3)截留液用乙醇沉淀后，取沉淀物用蒸餾水溶解，獲得醇沉溶解液；再向醇沉溶解液中加絡合劑進行絡合沉淀，取絡合沉淀物經鹽解離、離心后獲得解離上清液，解離上清液再經乙醇沉淀，最后沉淀物經脫水、干燥得到透明質酸；所述絡合劑為氯代十六烷基吡啶(CPC)。

進一步，步驟(1)脫脂處理是指將金槍魚眼玻璃體與丙酮以質量比1:1-4(優選1:4)混合進行脫脂(所述脫脂即為放置于磁力攪拌器上攪拌即可)。

進一步，步驟(2)中魚眼干粉與蒸餾水質量比為1:10-20，優選1:15。

進一步，步驟(3)所述木瓜蛋白酶以質量濃度0.5％木瓜蛋白酶水溶液的形式加入，木瓜蛋白酶水溶液體積加入量為上清液體積的0.1-0.5％，優選0.2％，木瓜蛋白酶酶活為10000～19000U/mg。

進一步，步驟(3)所述反應是在溫度70℃、壓力0.25MPa、pH5.0的條件下反應90min。

進一步，步驟(4)中所述絡合劑以質量濃度1-3％氯代十六烷基吡啶水溶液的形式加入，所述氯代十六烷基吡啶水溶液的體積加入量為醇沉溶解液體積的2-10倍(設定1倍CPC為季銨鹽陽離子的摩爾濃度等于透明質酸中羧酸根摩爾濃度時加入的量，最終添加量為2～10倍醇沉后溶解液)。

進一步，步驟(4)中解離絡合沉淀物的鹽為0.2-0.8mol/L(優選0.5mol/L)氯化鈉水溶液，用量為解離絡合沉淀物等體積。

進一步，步驟(4)中截留液沉淀所用乙醇為無水乙醇、體積濃度95％乙醇水溶液或含體積濃度1％乙酸鉀的乙醇溶液。

本發明所述酶膜反應器為本領域公知裝置，優選上海羽令過濾器材有限公司的YL-300型酶膜反應器。

本發明從金槍魚眼中提取透明質酸的方法，其優點在于：1)原料來自海洋廢料，綠色環保，對環境污染小；2)首次在魚眼透明質酸提取中應用了酶膜反應器，將酶解的高效性與膜的分離特性進行結合，集反應和分離純化為一體，縮短了反應時間，而且產品質量好，蛋白含量0.3％～0.7％，產品純度達80％～90％；3)所用試劑來源廣、價格低。

四、具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述，但本發明的保護范圍并不僅限于此：