[發明專利]聚乙二醇修飾的低分子量尿激酶及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201510499115.4
• 申請日: 2015-08-14
• 公開（公告）號: CN105087530A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 苗丕渠;韓大雄;厲道娟;耿春晨;王筱蒙;池正昌;沈小寧
• 申請（專利權）人: 揚州艾迪生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/72
• 分類號: C12N9/72;A61K38/49;A61P9/10;A61P7/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 謝東

技術領域

本發明屬于生物技術及制藥領域，涉及聚乙二醇修飾的蛋白類藥物，特別是聚乙二醇修飾的低分子量尿激酶及其制備方法和應用。

背景技術

尿激酶（Urokinase，簡寫為UK）是由人腎合成人尿釋放的一種血纖溶酶原激活劑（PlasminogenActivator），也稱雙鏈尿激酶型纖溶酶原激活劑（tcu-PA），是尿激酶原（pro-UK，也稱單鏈尿激酶型纖溶酶原激活劑，scu-PA）在纖溶酶、胰蛋白酶和激肽釋放酶等作用下，Lys¹⁵⁸-Ile¹⁵⁹間的肽鍵斷裂后形成的有激活纖溶酶原功能的酶。由于Lys¹⁵⁸-Ile¹⁵⁹間的肽鍵斷裂后形成的A鏈和B鏈仍通過二硫鍵Cys¹⁴⁸-Cys²⁷⁹連接，分子量與Pro-UK相同，故稱為高分子量尿激酶（High-Molecular-WeightUrokinase,HMW-UK），分子量約為54000道爾頓。纖溶酶繼續水解HWK-UK，在Lys¹³⁵-Lys¹³⁶斷裂失去EGF-like區和Kringle區，成為低分子量尿激酶（Low-Molecular-WeightUrokinase,LMW-UK），分子量約為33000道爾頓。尿激酶是臨床上重要的溶栓藥物，廣泛用于心腦血管和外周血管等處血栓性疾病的治療，但由于低分子量尿激酶缺乏纖維蛋白特異性，容易引起系統性出血等副反應，臨床使用受到限制，因此，藥典要求尿激酶原料藥中HMW-UK比例需大于90%，在尿激酶純化過程中需要去除低分子量尿激酶。

高分子量尿激酶與低分子量尿激酶的溶栓作用機制有所不同，它們本身并不直接用于血塊本身，而是首先激活體內的纖溶酶原，成為有活性的纖溶酶，纖溶酶降解纖維蛋白凝塊，亦能降解血循環中的纖維蛋白原、凝血因子Ⅴ和凝血因子Ⅷ等，使其分解成可溶性多肽，高分子量的尿激酶能特異結合病變的組織，但低分子量尿激酶沒有特異性識別功能。在用于提取純化尿激酶的粗品中，LMW-UK的比例高達30%，目前在醫藥研發中沒有得到充分利用，本專利將著重開發其溶解纖維蛋白原的功能，開發有效治療高纖維蛋白原血癥的藥物。

纖維蛋白原(Fibrinogen,Fg)又稱凝血因子Ⅰ，是由人肝細胞合成并分泌的一種糖基化蛋白，是促進血小板聚集的最主要的血液蛋白質，80%存在于血漿中，正常血漿含量為2～4g/L。目前研究大都將空腹血漿纖維蛋白原水平>4.0g/L者稱為高纖維蛋白原血癥(Hyperfibrinogenemia)。在各種病理狀態下，血漿纖維蛋白原的異常升高會增加血液黏度、促進血小板聚集、參與調控與炎癥細胞、內皮細胞以及其他蛋白質的結合，通過改變血液流變學、損傷血管內皮、介導炎癥反應以及參與血栓形成等多種途徑參與機體多種疾病的病理過程。大量研究表明，血漿纖維蛋白原水平升高是動脈粥樣硬化（AS）、血栓栓塞并發癥和糖尿病血管并發癥的重要危險因素，在糖尿病腎病的發生和發展上也起重要作用，嚴格控制這些危險因素是預防和延緩血管并發癥發生和發展的重要措施。

目前，對于高纖維蛋白原血癥患者，臨床治療方案主要有：①應用抗血栓藥物如阿司匹林或氯吡格雷來治療高纖維蛋白原血癥；②采用降纖酶等纖維蛋白溶解劑、tPA等降纖制劑來降低纖維蛋白原水平；③采用低分子肝素治療，但只能短期用于高危病人；④對于嚴重的高纖維蛋白原血癥，常采用體外血漿脂類過濾器治療，JX-DELP體外脂類過濾器降脂治療，有效的降低甘油三脂、脂肪肝、高粘血、高脂血等，安全可控。但是，以上的這些治療方法都存在一定的缺陷和局限性，研究發現阿司匹林或氯吡格雷等藥物在治療糖尿病并發的高纖維蛋白血癥的過程中，患者易出現過敏、梗死和出血等副反應；而在一些興奮性毒素誘導的神經元死亡模型和卒中模型中，tPA會促進神經元死亡，還會增加腦出血的風險；降纖酶類藥物由于來源問題，免疫原性較高，副作用較大。因此，開發長效、高效且免疫原性低的降纖藥物，對延緩高纖維蛋白原血癥相關疾病的發生發展，降低這些疾病的發病和死亡風險有著重要意義。