[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)普魯蘭酶的重組短小芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510498210.2
• 申請日: 2015-08-13
• 公開（公告）號: CN105112348B
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設計）人: 吳敬;鄒純;段緒果
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/75;C12N9/44;C12R1/07
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種高產(chǎn)普魯蘭酶的重組菌，其特征在于，所述重組菌以短小芽孢桿菌為宿主，通過重組質(zhì)粒pulA/pSVEB表達來源于脫支芽孢桿菌的普魯蘭酶；

所述重組質(zhì)粒pulA/pSVEB是將缺失了啟動子和信號肽的pWB980、普魯蘭酶表達元件、缺失了信號肽的pET20b(+)連接成環(huán)得到的；所述普魯蘭酶表達元件的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

2.一種權(quán)利要求1所述重組菌的構(gòu)建方法，其特征在于，所述方法是：(1)按照缺失了啟動子和信號肽的pWB980、SEQ ID NO.1所示的普魯蘭酶表達元件、缺失了信號肽的pET20b(+)的順序，將這三段核苷酸序列用In-Fusion酶連接，得到重組質(zhì)粒pulA/pSVEB；(2)將重組質(zhì)粒pulA/pSVEB電轉(zhuǎn)至短小芽孢桿菌Brevibacillus brevis CCTCC AB94025中，得到重組菌pulA/pSVEB/Brevibacillus brevis。

3.一種權(quán)利要求1所述重組菌生產(chǎn)普魯蘭酶的方法，其特征在于，所述方法是將重組菌種子液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，于25-37℃發(fā)酵培養(yǎng)；所述發(fā)酵培養(yǎng)基中含有葡萄糖10-50g/L，棉籽粉1-10g/L，牛肉浸膏10-30g/L，MgCl₂·6H₂O 1-20g/L和卡那霉素。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法是將重組菌種子液接種至發(fā)酵罐，控制溫度25-37℃、溶氧10-50％、pH5.0-7.0，并流加葡萄糖維持發(fā)酵液中殘?zhí)菨舛葹?-30g/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法是將培養(yǎng)好的種子液接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，控制在30℃、pH為7.0±0.1、通風量1.0vvm、溶氧為30％、殘?zhí)菨舛仍?g/L以上，培養(yǎng)72h；其中發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖30g/L，牛肉浸膏30g/L，棉籽粉5g/L，MgCl₂·6H₂O 12g/L和卡那霉素。