[發明專利]攜帶人乳頭瘤病毒16型多點突變型E7mm抗原基因的重組腺相關病毒載體及其構建方法與應用有效
| 申請號： | 201510492396.0 | 申請日： | 2015-08-12 |
| 公開（公告）號： | CN105177048B | 公開（公告）日： | 2018-02-02 |
| 發明（設計）人： | 劉勇;陳巧林;曾昭鵬;高洪吉;龔研浩;董文娟;張慧 | 申請（專利權）人： | 廣東拓譜康生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/864 | 分類號： | C12N15/864;C12N7/01;C12N5/10;A61K48/00;A61K39/12;A61P31/20;A61P35/00 |
| 代理公司： | 廣州勝沃園專利代理有限公司44416 | 代理人： | 張帥 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市高新技術產業開*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 攜帶 乳頭 病毒 16 多點 突變型 e7 sub mm 抗原 基因 重組 相關 載體 及其 構建 | ||
1.一種攜帶人乳頭瘤病毒16型(HPV-16)突變型E7mm抗原基因的重組腺相關病毒(rAAV)載體，是將腺相關病毒(AAV)載體中的腺相關病毒結構基因Rep和Cap剔除并帶有AVV的p5啟動子、巨噬細胞病毒(cytomegalovirus，CMV)啟動子、SV40病毒啟動子和beta肌動蛋白啟動子(β-actin)中的任意一個啟動子的AVV載體作為出發載體，將多點突變型HPV-16 E7mm抗原基因插入出發載體中，獲得全新的rAVV載體，即攜帶HPV-16 E7mm抗原基因的重組腺相關病毒載體；所述多點突變型HPV-16 E7mm抗原基因為以下之一：
具有nt175(58aa)、nt280(94aa)兩個突變位點的多點突變型基因，命名為HPV-16 E7mm22，其核苷酸序列如序列表中序列3所示；
具有nt271(91aa)、nt280(94aa)兩個突變位點的多點突變型基因，命名為HPV-16 E7mm23，其核苷酸序列如序列表中序列4所示；
具有nt175(58aa)、nt271(91aa)、nt280(94aa)三個突變位點的多點突變型基因，命名為HPV-16 E7mm3，其核苷酸序列如序列表中序列5所示；
所述腺相關病毒載體為剔除腺相關病毒(AAV)結構基因Rep和Cap的腺相關病毒載體，其攜帶的啟動子為p5啟動子、巨噬細胞病毒(cytomegalovirus，CMV)啟動子、人beta肌動蛋白啟動子(β-actin)或SV40病毒早期啟動子中的任意一個。
2.一種構建權利要求1所述重組腺相關病毒載體的方法，包括以下步驟：
1)將HPV-16 E7抗原的第58、91和94位的半胱氨酸(G)中兩個或三個改變為甘氨酸(C)，即將HPV-16 E7基因開放讀碼框nt175、nt271、nt280中的兩個或三個胸腺嘧啶(T)替換為鳥嘌呤(G)，得到具有兩個或三個突變位點的多點突變型HPV-16 E7抗原基因，統一命名為HPV-16 E7mm；
2)分別將多點突變型HPV-16 E7mm抗原基因插入已將腺相關病毒結構基因Rep和Cap剔除的腺相關病毒載體中，分別得到攜帶多點突變型HPV-16 E7mm抗原基因的重組腺相關病毒載體(AAV/HPV-16 E7mm)或攜帶HPV-16 E7抗原基因的重組腺相關病毒載體(AAV/HPV-16 E7)；所述腺相關病毒載體攜帶的啟動子為p5啟動子、巨噬細胞病毒(cytomegalovirus，CMV)啟動子、人beta肌動蛋白啟動子(β-actin)或SV40病毒早期啟動子中的任意一個。
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