[發(fā)明專利]攜帶人乳頭瘤病毒16型多點突變型E7mm抗原基因的重組腺相關病毒載體及其構建方法與應用

有效

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• 申請日: 2015-08-12
• 公開（公告）號: CN105177048B
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發(fā)明（設計）人: 劉勇;陳巧林;曾昭鵬;高洪吉;龔研浩;董文娟;張慧
• 申請（專利權）人: 廣東拓譜康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;C12N7/01;C12N5/10;A61K48/00;A61K39/12;A61P31/20;A61P35/00
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司44416
• 代理人: 張帥

技術領域

本發(fā)明涉及生物領域中的載體及其應用，特別是涉及一種攜帶人乳頭瘤病毒16型(Human Papillomavirus Type 16，HPV-16)多點突變型E7_mm抗原基因的重組腺相關病毒載體(rAAV)及其構建方法與其在制備抗HPV-16感染及其相關疾病(如由HPV-16感染導致的腫瘤)治療藥物中的應用。、其構建方法與其在制備抗HPV-16感染以及相關性疾病的藥物中的應用。

背景技術

腺相關病毒(AAV)的基因結構已經(jīng)被鑒定。1983年，Samulski等人描述了AAV的末端重復片段(上游5’端片段，下游3’端片段)(Samulski RJ,Srivastava A,Berns KI,Muzyczka N.Rescue of adeno-associated virus from recombinant plasmids:gene correction within the terminal repeats of AAV.Cell.33:135-143.)。1984年，Hermonat等人描述了AAV的低感染顆粒(Lip)基因和包膜(Cap)基因(Hermonat PL,Labow MA,Wright R,Berns KI,Muzyczka N.Genetics of adeno-associated virus:isolation and preliminary characterization of adeno-associated virus type 2mutants.J Virol.51:329-339.Hermonat,P.L.,and Muzyczka,N.Use of adeno-associated virus as a mammalian DNA cloning vector:transduction of neomycin resistance into mammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6466-6470.)。1986年，Labow等人鑒定了位于上游5’端片段和復制蛋白(Rep)基因之間的p5啟動子(Labow MA,Hermonat PL,Berns KI.Positive and negative autoregulation of the adeno-associated virus type 2genome.J Virol.160:251-258.)。

AAV是一種非致病性的缺陷性病毒，需要其它病毒(如腺病毒)的基因產(chǎn)物輔助，才能裝配成為具有感染性的病毒顆粒。AAV基因組全長約4700堿基對(bp)，兩端為重復末端片段(TR)，中間為病毒的結構基因，包括與病毒復制有關的Rep基因和病毒包膜(Cap)基因。由于存在AAV病毒自身的不穩(wěn)定性及其攜帶外源性基因(治療基因)長度有限等方面的缺陷，因此有必要對其進行基因重組形成重組腺相關病毒(recombinant adeno-associated virus，rAAV)?，F(xiàn)有大量研究表明，將AAV基因組中的結構基因刪除，可明顯增加外源性基因的容量。此外，將具有治療作用的外源性 基因插入rAAV中，可制備成具有感染性的rAAV病毒顆粒。

1984年，美國Paul L.Hermonat率先證明AAV載體可用于人類疾病的基因治療(Hermonat,P.L.,and Muzyczka,N.Use of adeno-associated virus as a mammalian DNA cloning vector:transduction of neomycin resistance into mammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6466-6470.)。目前，主要是歐美國家在進行以AAV為基礎的基因治療人類疾病的臨床試驗。據(jù)美國糧食和藥品管理局統(tǒng)計，現(xiàn)有10余項以AAV為基礎的基因治療臨床試驗正在進行，主要是將攜帶治療基因的AAV病毒注入患者體內(nèi)，使其在體內(nèi)表達治療基因，從而達到治療疾病的目的。主要針對治療的疾病有帕金森氏綜合癥、風濕性關節(jié)炎、血友病、心力衰竭、進行性肌萎縮和奧茲海默綜合癥等非腫瘤性疾病。2012年11月2日歐盟批準UniQure公司的Glybera產(chǎn)品在歐盟27個成員國使用，這是西方國家第一個獲批準的基因治療藥物，它是利用腺相關病毒I型(AAV-1)攜帶外源基因用于治療脂蛋白脂酶缺乏遺傳病(LPLD)的基因藥物。