[發(fā)明專(zhuān)利]一種異核苷或異核苷聯(lián)合2’-脫氧肌苷修飾的腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510490310.0
• 申請(qǐng)日: 2015-08-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105063055B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊振軍;李昆峰;鄧家荔
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/115
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/115;C07H19/20;C07H19/173;C07H1/00;A61K31/7115;A61P35/00;G01N33/574
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司11139
• 代理人: 孫皓晨,韓小雷

1.一種異核苷或異核苷聯(lián)合2’-脫氧肌苷修飾的腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10，其特征在于，選自以下核酸適配體所組成群組中的一種：

1）在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的18位摻入化學(xué)式I所示的異核苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，Base為腺嘌呤A；

2）在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的21位摻入化學(xué)式II所示的異核苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，Base為胸腺嘧啶T；

3）在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的32位摻入化學(xué)式III所示的2’-脫氧肌苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，Base為胸腺嘧啶T；

4）同時(shí)在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的18位和26位摻入化學(xué)式I所示的異核苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，18位Base為腺嘌呤A，26位Base為胸腺嘧啶T；

5）同時(shí)在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的18位和26位摻入化學(xué)式I所示的異核苷以及在32位摻入化學(xué)式III所示的2’-脫氧肌苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，18位Base為腺嘌呤A，26位和32位Base為胸腺嘧啶T；

修飾前的腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異核苷或異核苷聯(lián)合2’-脫氧肌苷修飾的腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10，其特征在于，是通過(guò)同時(shí)在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的18位26位摻入化學(xué)式I所示的異核苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，18位Base為腺嘌呤A，26位Base為胸腺嘧啶T。

3.一種制備權(quán)利要求1或2所述的異核苷或異核苷聯(lián)合2’-脫氧肌苷修飾的腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10的方法，其特征在于，按照以下任一種方法進(jìn)行：

1）在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的18位摻入化學(xué)式I所示的異核苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，Base為腺嘌呤A；

2）在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的21位摻入化學(xué)式II所示的異核苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，Base為胸腺嘧啶T；

3）在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的32位摻入化學(xué)式III所示的2’-脫氧肌苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，Base為胸腺嘧啶T；

4）同時(shí)在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的18位和26位摻入化學(xué)式I所示的異核苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，18位Base為腺嘌呤A，26位Base為胸腺嘧啶T；

5）同時(shí)在腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的18位和26位摻入化學(xué)式I所示的異核苷以及在32位摻入化學(xué)式III所示的2’-脫氧肌苷代替天然核苷在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)而得到的核酸適配體，其中，18位Base為腺嘌呤A，26位和32位Base為胸腺嘧啶T；

修飾前的腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在對(duì)腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10進(jìn)行化學(xué)修飾前，將化學(xué)式I、化學(xué)式II所示的異核苷和化學(xué)式III所示的2’-脫氧肌苷分別制備成化學(xué)式IV、化學(xué)式V所示的異核苷亞磷酰胺單體和化學(xué)式VI所示的2’-脫氧肌苷亞磷酰單體；

其中，Base為腺嘌呤A、胸腺嘧啶T、鳥(niǎo)嘌呤G或胞嘧啶C。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，使用固相合成技術(shù)，采用亞磷酰胺法合成核酸適配體的寡核苷酸鏈，在DNA合成儀上，將一個(gè)或幾個(gè)權(quán)利要求4所述的異核苷亞磷酰胺單體、2’-脫氧肌苷亞磷酰胺單體分別或同時(shí)摻入到所合成的腱糖蛋白C核酸適配體GBI-10正義鏈序列中代替天然核苷亞磷酰胺單體在相應(yīng)位置進(jìn)行偶聯(lián)，每偶聯(lián)一個(gè)核苷為一個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括四個(gè)反應(yīng)：脫DMT、偶聯(lián)、封閉、氧化。