[發明專利]小鯢科動物皮膚顯微組織切片的制備方法

有效

• 申請號: 201510487750.0
• 申請日: 2015-08-10
• 公開（公告）號: CN105241685B
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 熊建利;劉秀英;孫原野;張亞男;胡益源;呂云云;孫平
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: G01N1/06
• 分類號: G01N1/06;G01N1/28
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司41119
• 代理人: 牛愛周

1.小鯢科動物皮膚顯微組織切片的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）脫水：將經固定處理的小鯢科動物皮膚組織依次浸入濃度梯度50%、70%、80%、90%、95%、100%的乙醇中脫水，其中95%、100%乙醇各重復兩次，每個梯度脫水45~60min；

（2）透明：將經脫水處理的皮膚組織浸入100%乙醇與二甲苯的混合液中2~3min，取出后再浸入二甲苯中10~30min；所述100%乙醇與二甲苯的體積比為1:1；

（3）浸蠟：將經透明處理的皮膚組織放入二甲苯與石蠟的混合液中20~30min，取出后再分兩次放入石蠟中，每次45~60min；所述二甲苯與石蠟的體積比為1:1；

（4）將經浸蠟處理的皮膚組織包埋，依次經切片、展片、貼片、烤片、染色、封固處理，即得；所述切片的厚度為4~6μm，切片后置于42~45℃的水中展片；所述貼片、烤片為：待切片自然伸展平后從水中取出，控干水分，置于37~45℃下干燥2~4h，或者于室溫下自然干燥一夜；

步驟（4）中所述染色為H.E染色，操作步驟為：將切片依次置于二甲苯Ⅰ10min、二甲苯Ⅱ10min、100%乙醇Ⅰ5min、100%乙醇Ⅱ5min、95%乙醇5min、85%乙醇5min、75%乙醇5min、水5min、蘇木精染液10~20min，流水沖洗5min，再置于HCl-乙醇分化液20~40s，流水沖洗10~30min，鏡檢，流水沖洗2min，再依次置于70%乙醇1min、85%乙醇1min、伊紅染液2min、95%乙醇Ⅰ2min、95%乙醇Ⅱ2min、100%乙醇Ⅰ2min、100%乙醇Ⅱ2min、二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ5min。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述蘇木精染液為：將1g蘇木精溶于20mL 100%乙醇中得甲液，50g鉀明礬溶于300mL蒸餾水中得乙液；將甲液、乙液混合，煮沸2~3min，再加蒸餾水定容至1000mL；最后加入0.2g碘酸鈉，即得。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述伊紅染液為：將0.5g伊紅加入到100mL 85%乙醇中，溶解完全，即得。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述HCl-乙醇分化液為：將1mL鹽酸加入到99mL 70%乙醇中，混勻，即得。