[發明專利]一種生產羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法

在審

• 申請號: 201510475366.9
• 申請日: 2015-08-05
• 公開（公告）號: CN105061599A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: 徐志偉;張傳明;袁金城
• 申請（專利權）人: 海奧斯生物科技鎮江有限公司
• 主分類號: C07K16/38
• 分類號: C07K16/38;C07K16/06
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 許丹丹

技術領域

本發明涉及一種生產羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，屬于抗血清制備技術領域。

背景技術

小分子抗原指分子量在4KD-10KD之間，大于150KD為大分子抗原，胱抑素C(Cys-C)分子量較小為13KD，其表面面積相應較小，接觸免疫細胞的機率少，且結合不牢固，其免疫原性不強；抗體產生還與分子結構有關，越復雜免疫原性越強，反之亦然；影響優質抗體產生還有很多因素。

目前，將人胱抑素C蛋白抗原與佐劑乳化后，按一定的程序免疫動物，可在動物血清中產生抗人的胱抑素C蛋白抗體。雖然目前的生產方法都可以產生一定量的抗體，但是抗體產生速度慢，水平較低，且抗原用量高。

發明內容

發明目的：為了克服現有技術中存在的不足，本發明提供了一種生產羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法。

技術方案：為實現上述目的，本發明提供了一種生產羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，包括以下步驟：

(1)抗原準備：選用人胱抑素C蛋白抗原、用無菌PBS和弗氏佐劑制成免疫原乳劑，備用；

(2)第一次注射：使用上述免疫原乳劑對羊進行注射，注射部位為左右足底2點、左右腹股溝皮下4點、頸部兩側皮下2點、背部皮下4點，總共12個注射點，平均注射；

(3)第二次注射：第一次注射后15天進行第二次注射，注射部位為左右腹股溝淋巴結內2點、左右腹股溝皮下4點、頸部兩側皮下2點、背部皮下4點，共計12個注射點，平均注射；

(4)第三次注射：第二次注射后9-11天進行第三次注射，注射部位為左右腹股溝皮下4點、頸部兩側皮下2點、背部皮下4點，共計10個注射點，平均注射；

(5)第四次注射：第三次注射后9-11天進行第四次注射，注射部位為左右腹股溝皮下4點、頸部兩側皮下2點、背部皮下4點，共計10個注射點，平均注射；

(6)第五次注射：第四次注射后9-11天進行第五次注射，注射部位為左右腹股溝皮下4點、頸部兩側皮下2點、背部皮下4點，共計10個注射點，平均注射；

(7)第六次注射：第五次注射后9-11天進行第六次注射，注射部位為左右腹股溝皮下4點、頸部兩側皮下2點、背部皮下4點，共計10個注射點，平均注射；

(8)第七次注射：第六次注射后9-11天進行第七次注射，注射部位為左右腹股溝皮下4點、頸部兩側皮下2點、背部皮下4點，共計10個注射點，平均注射；

(9)第八次注射：第七次注射后9-11天進行第八次注射，注射部位為左右腹股溝皮下4點、頸部兩側皮下2點、背部皮下4點，共計10個注射點，平均注射；

(10)取血清：第八次注射五天后對免疫的羊靜脈采血，血液放入38.5℃水箱中1小時，待血清充分析出，經離心沉淀分離出抗血清，放至2～8℃冰箱保存；

(11)血清效價檢測：取上述抗血清，檢測效價。

作為優選，所述第一次注射前乳化用的弗氏佐劑為完全弗氏佐劑。

作為另一種優選，所述第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射前乳化用的弗氏佐劑為不完全弗氏佐劑。

作為另一種優選，所述第一次注射的劑量為每只羊0.25mg人胱抑素C蛋白抗原。

作為另一種優選，所述第二次注射的劑量為每只羊0.5mg人胱抑素C蛋白抗原。

作為另一種優選，所述第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射的劑量為每只羊1mg人胱抑素C蛋白抗原。

作為另一種優選，所述血清效價檢測的方法為瓊擴方法。

作為另一種優選，所述羊為土山羊。

本發明中羊可以選擇土山羊、湖羊和雜交羊，優選土山羊；所述土山羊為長江三角洲白山羊；所述湖羊為太湖流域的一種產羔皮的多胎綿羊品種；所述雜交羊為波爾山羊為父本，土山羊為母本的雜交第一代羊。

本發明中弗氏完全佐劑含結核分枝桿菌的細胞壁成分，可刺激致敏淋巴細胞的分裂和漿細胞產生抗體，引起淋巴結的腫大，加強對抗原的抗體反應。

此外，本發明通過特定抗原劑量、免疫時間、注射部位和注射次數，對羊進行免疫，最終得到較高的抗體水平。本發明重點是開始三次免疫中每只羊注射的抗原劑量成倍增加，以逐漸增強抗原對機體的刺激。

有益效果：相對于現有技術，本發明生產羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，成本低，過程簡單，不僅能穩定生產抗體，并且產生抗體速度快，抗體水平高，抗原用量小。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作更進一步的說明。

實施例1