[發(fā)明專利]通過極光激酶A的熒光原位雜交非侵入性檢測膀胱癌

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510472121.0
• 申請日: 2008-12-12
• 公開（公告）號: CN105112512A
• 公開（公告）日: 2015-12-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: H·B·格羅斯曼;B·切爾尼亞克;S·薩伯拉塔
• 申請（專利權(quán)）人: 得克薩斯大學(xué)體系董事會
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務(wù)所 11038
• 代理人: 袁泉

本申請是申請日為2008年12月12日、申請?zhí)枮?00880123846.7、發(fā)明名稱為“通過極光激酶A的熒光原位雜交非侵入性檢測膀胱癌”的發(fā)明專利申請的分案申請。

發(fā)明背景

本發(fā)明在由NationalCancerInstitute授予的授權(quán)號U01CA85078下由美國政府支持進行。美國政府具有本發(fā)明中的特定權(quán)利。

本發(fā)明一般涉及癌癥檢測領(lǐng)域。更具體而言，它涉及膀胱癌的檢測。

發(fā)明概述

在一個實施方案中，本發(fā)明涉及檢測患者中的膀胱癌的方法，其包括從患者的尿中分離膀胱細胞；使膀胱細胞與經(jīng)標記的DNA探針雜交，其中探針識別極光激酶A(aurorakinaseA)基因的至少部分，以產(chǎn)生與經(jīng)標記的DNA探針雜交的膀胱細胞樣品；并且計數(shù)樣品中的膀胱細胞數(shù)目、樣品中的每個膀胱細胞中的極光激酶A基因拷貝數(shù)、和樣品中具有極光激酶A基因的至少拷貝數(shù)第一閾值的膀胱細胞數(shù)目。

附圖簡述

下述附圖構(gòu)成本發(fā)明說明書的部分，并且包括在內(nèi)以進一步證實本發(fā)明的特定方面。本發(fā)明通過參考與本文呈現(xiàn)的特定實施方案的詳述組合的這些附圖中的一個或多個可以得到更好地理解。

圖1。極光激酶A在移行細胞癌(TCC)中的表達及其與DNA倍數(shù)性的關(guān)聯(lián)。A，通過定量RT-PCR揭示的相鄰尿道上皮和TCC的成對樣品中的極光激酶A水平。B和C，分別通過顯示近二倍體(2c)DNA含量和顯著的非整倍體(6c)的腫瘤核的圖像分析產(chǎn)生的DNA直方圖。D，低級別(級別1-2)、淺表(Ta-Tla)和高級別(級別3)、侵入性(Tlb和更高的)TCC以及近二倍體和非整倍體TCC中的極光激酶A的平均表達水平。

圖2。在膀胱癌細胞系中的極光激酶A表達和染色體拷貝數(shù)。A，通過定量RT-PCR，極光激酶A在膀胱癌細胞系中的表達與經(jīng)培養(yǎng)的尿道上皮細胞(NU204)相比較。B，使用針對染色體3、7和17的著絲粒探針通過定量FISH揭示的染色體拷貝數(shù)。C，在3組膀胱癌細胞系中的極光激酶A的平均表達水平。D，在C中顯示的3組膀胱癌細胞系中，用針對染色體3、7和17的著絲粒探針通過FISH揭示的癌細胞系中的平均染色體拷貝數(shù)。

圖3。使用抗GFP抗體用包含野生型極光激酶A插入片段的腺病毒載體轉(zhuǎn)染的SV40尿道上皮細胞中的極光激酶A-GFP融合蛋白的異位表達。A，顯示極光激酶A-GFP融合蛋白的表達的Western印跡分析(上圖)。用DAPI作為核復(fù)染劑顯示極光激酶A-GFP融合蛋白的異位表達的免疫熒光分析(下圖)。用不含極光激酶A插入片段的腺病毒載體感染的細胞的免疫熒光圖像(a，b)。用紅色濾光器獲得的圖像揭示2個中心體(a)。用綠色濾光器獲得的圖像揭示沒有極光激酶A-GFP融合蛋白的異位表達(b)。用包含極光激酶A插入片段的腺病毒載體感染的細胞的免疫熒光圖像(c，d)。用紅色濾光器獲得的圖像顯示用抗微管蛋白抗體揭示的中心體倍增(紅色)(c)。用綠色濾光器獲得的圖像顯示在中心體中異位表達的極光激酶A-GFP蛋白質(zhì)(d)。B，通過異位表達的極光激酶A誘導(dǎo)的中心體和染色體拷貝數(shù)的定量評估。C，與用PI復(fù)染劑揭示的DNA含量(紅色熒光)相關(guān)的異位表達的極光激酶A-GFP蛋白質(zhì)(綠色熒光)的雙重?zé)晒釬ACS分析。在用包含野生型極光激酶A插入片段的腺病毒載體感染后的雙重?zé)晒夥植紙D(右圖)。用空腺病毒載體感染的細胞的對照分布圖(右圖)。與對照相比較(左圖)，注意到在指定為A和B的分布圖區(qū)域中的非整倍體(aneuploid)細胞的增加(右圖)。D，通過C中顯示的雙重?zé)晒釬ACS分析和軟瓊脂上的集落形成揭示的非整倍體細胞的定量評估。Ad/對照：用不含極光激酶A插入片段的腺病毒載體感染的細胞，Ad/極光激酶AGFP：用包含野生型極光激酶A的腺病毒載體轉(zhuǎn)染的細胞，MOI：感染復(fù)數(shù)。