[發(fā)明專利]基于miR1511的大豆分子標(biāo)記iSIndel及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510471008.0
• 申請日: 2015-08-04
• 公開（公告）號: CN105002288A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱麗娟;羅中欽;南美樸先崔;金龍國
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中基于miR1511的大豆分子標(biāo)記iSIndel及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

microRNA(miRNA)是一類長度為19-24nt的非編碼RNA，miRNA在轉(zhuǎn)錄后水平通過與mRNAs的序列互補(bǔ)識別靶基因，并引起靶基因的降解或抑制其翻譯，最終達(dá)到抑制特定基因表達(dá)的目的(Bartel?DP.MicroRNAs:target?recognition?and?regulatory?functions.Cell,2009,136(2):215–233.)。近年來大量研究表明，miRNA參與調(diào)控生長發(fā)育、應(yīng)答生物及非生物脅迫和物種進(jìn)化等許多重要生物學(xué)過程(Bushati?N,Cohen?S?M.MicroRNA?functions.Annual?Review?of?Cell?and?Developmental?Biology,2007,23:175-205.)。因此miRNA研究對于提高植物的產(chǎn)量和品質(zhì)有重要的意義。

近年，Yijie?Gui等(Gui?Y?et?al.,iSNAP:a?small?RNA-based?molecular?marker?technique.Plant?Breeding,2011,130(5):515-520.)以煙草和水稻為材料開發(fā)了一種基于小RNA序列的分子標(biāo)記iSNAP，為分子標(biāo)記輔助育種提供了一種新手段。Pang?Mingxiong等(Pang?M?et?al.,Comparative?expression?of?miRNA?genes?and?miRNA-based?AFLP?marker?analysis?in?cultivated?tetraploid?cottons.Journal?of?Plant?Physiology,2011,168:824-830.)以棉花為材料開發(fā)了一種基于miRNA的AFLP分子標(biāo)記。Xuemei?Chen等(Chen?X?et?al.,Linkage?mapping?and?expression?analysis?of?miRNAs?and?their?target?genes?during?fiber?development?in?cotton.BMC?Genomics,2013,14:706.)以棉花為材料開發(fā)了基于miRNA的SRAP標(biāo)記(Sequence-Related?Amplified?Polymorphism)。miRNA這類內(nèi)源單鏈非編碼小分子RNA，在真核生物體中廣泛存在(Bartel?D?P.MicroRNAs:genomics,biogenesis,mechanisms,and?function.Cell,2004,116:281-297.)。申請人通過5‘RACE-PCR技術(shù)驗(yàn)證了miR1511的靶基因?yàn)镚mrpl4a，Gmrpl4a屬于60S核糖體蛋白L4家族(RPL4)，核糖體蛋白是核糖體亞基的關(guān)鍵成分,它們最為熟知的功能是組裝核糖體和蛋白質(zhì)合成。大量研究表明,在動植物中一些核糖體蛋白還有多種與核糖體無關(guān)的生物學(xué)功能，如細(xì)胞的生長、分化、發(fā)育、凋亡和逆境調(diào)節(jié)等方面(Luo?et?al.,MiR1511co-regulates?with?miR1511^*to?cleave?the?GmRPL4a?gene?in?soybean.Chinese?Science?Bulletin,2012(57)3804-3810)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何鑒定一年生野生大豆(Glycine?soja?Sieb.et?Zucc.)原生境，及如何鑒別栽培大豆(Glycine?max(L.)Merr.)和一年生野生大豆。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了大豆分子標(biāo)記或其多態(tài)性在鑒定或輔助鑒定野生大豆原生境中的應(yīng)用。

本發(fā)明所提供的大豆分子標(biāo)記或其多態(tài)性在鑒定或輔助鑒定野生大豆原生境中的應(yīng)用中，所述大豆分子標(biāo)記(名稱為miR1511?iSIndel)，是基于miR1511的大豆分子標(biāo)記，miR1511?iSIndel為以野生大豆的基因組DNA為模板，采用由與SEQ?ID?No.1的第190位上游特異結(jié)合的單鏈DNA和與SEQ?ID?No.1的第386位下游特異結(jié)合的單鏈DNA組成的引物對進(jìn)行擴(kuò)增得到的DNA分子。

其中，SEQ?ID?No.1由555個(gè)核苷酸組成，SEQ?ID?No.1的第243-263位為miR1511的對應(yīng)序列(即成熟miR1511的序列)。