[發明專利]改良凝膠電泳檢測血清前β1高密度脂蛋白的方法和應用

有效

• 申請號: 201510466708.0
• 申請日: 2015-08-03
• 公開（公告）號: CN105137070B
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 陳允欽;張曉金
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬中山醫院
• 主分類號: C07K1/26
• 分類號: C07K1/26
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.非線性梯度凝膠和蘇丹黑B染色液在精準分離和定量分析血清preβ1-HDL中的應用，所述的非線性梯度凝膠是由三段濃度依次為3.0％、3.6％和7.0％的聚丙烯酰胺凝膠共同組成，所述的蘇丹黑B染色液中蘇丹黑B的濃度為0.5-1.0w/v％，溶劑異丙醇和乙二醇的體積比為4:1。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的非線性梯度凝膠分別作為一維非線性梯度管狀凝膠體系和二維非線性梯度平板凝膠體系分離血清preβ1-HDL的電泳介質，所述的一維非線性梯度管狀凝膠體系分離蘇丹黑B預染色的血清preβ1-HDL。

3.一種精準分離和定量分析血清preβ1-HDL的方法，其特征在于，采用非線性梯度凝膠和蘇丹黑B染色液精準分離和定量分析血清preβ1-HDL，其中非線性梯度凝膠是由三段濃度依次為3.0％、3.6％和7.0％的聚丙烯酰胺凝膠共同組成，所述的蘇丹黑B染色液中蘇丹黑B的濃度為0.5-1.0w/v％，溶劑異丙醇和乙二醇的體積比為4:1。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的非線性梯度凝膠分別作為一維非線性梯度管狀凝膠體系和二維非線性梯度平板凝膠體系分離血清preβ1-HDL的電泳介質。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，采用一維非線性梯度管狀凝膠體系分離蘇丹黑B預染色的血清preβ1-HDL，所述的蘇丹黑B染色液中蘇丹黑B的濃度為0.5-1.0w/v％，溶劑異丙醇和乙二醇的體積比為4:1。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的三段濃度依次為3.0％、3.6％和7.0％的聚丙烯酰胺凝膠作為分離膠，對應的膠層高度分別為7mm、40mm和45mm，誤差范圍為±3mm，三層分離膠的總高度為82mm，誤差范圍±5mm。

7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的非線性梯度凝膠在一維管狀凝膠體系中的規格為內徑6-8mm，外徑8-10mm，非線性梯度凝膠在二維平板凝膠體系中的規格為厚度為2-3mm，寬度為60-80mm。

8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的一維非線性梯度管狀凝膠體系分離蘇丹黑B預染色的血清preβ1-HDL，電泳緩沖液為5mM Tris和38.4mM甘氨酸，電泳條件為100V，2.5h，電泳后將遷移距離原點65-75mm處孤立的染色區帶定義為preβ1-HDL；所述的二維非線性梯度平板凝膠體系分離血清preβ1-HDL，電泳緩沖液為5mM Tris和38.4mM甘氨酸，電泳條件為100V，3.5h，電泳后將preβ泳道上遷移距離原點65-75mm處印跡區帶定義為preβ1-HDL和游離的Apo A1多聚體，遷移距離原點80-90mm處印跡區帶定義為游離的Apo A1單體。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述的二維非線性梯度平板凝膠體系分離血清preβ1-HDL，電泳前在加樣區加入少量酚紅溶液作為電泳指示劑。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述的一維非線性梯度管狀凝膠體系分離蘇丹黑B預染色的血清preβ1-HDL，采用光密度掃描定量，以空白凝膠掃描值為統一參比，計算出preβ1-HDL占血脂總體的百分含量；二維非線性梯度平板凝膠體系分離血清preβ1-HDL、游離的Apo A1單體和多聚體，采用免疫印跡、化學發光和膠片成像技術進行定性，在同一批內比較其相對含量。