[發明專利]一種產木聚糖酶微生物甄別培養基及其培養方法

有效

• 申請號: 201510464175.2
• 申請日: 2015-08-03
• 公開（公告）號: CN105063170B
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 郭剛;張鳳娟;楊曉琳;陳乾;郭素霞
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院海口實驗站
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 王淑玲

本發明提供了一種產木聚糖酶微生物甄別培養基，使用所述微生物甄別培養基來培養微生物的方法，以及該微生物甄別培養基在酶活性菌株的初篩中的用途，以及所述微生物甄別培養基在菌株的保藏及復壯中的用途。采用本方法，適合在野外作業，當天采集的樣品，當天即可處理完畢，不需要將野外樣品帶回實驗室。

技術領域

本發明涉及微生物領域，具體地涉及一種產木聚糖酶微生物甄別培養基及其培養方法。

背景技術

傳統篩選木聚糖酶產酶活性菌株的方法是，先從自然界分離培養微生物，再采用隨機獲取的純培養微生物作為出發菌株，在含有木聚糖底物的瓊脂平板上接種，并配加一定濃度的色素指示物，通過色素，產酶的活性菌株則會產生相應的透明圈，從而將產酶活性菌株甄別、篩選出來，此法一般稱為透明圈法。

此弊病主要有二種。第一，不利于野外作業。野外采集、收集的土壤或其它樣品必須帶回實驗室進行分離培養，獲得單菌落純培養物后，再通過透明圈法篩選木聚糖酶活性菌株。在采集與分離這個時間段內，樣品的微生物群落已經發生了極大的變化，絕大多數生長勢較弱的稀有微生物已經被優勢微生物群體“埋沒”。第二，篩選方法過于精細，使整個篩選過程實驗工作量過大，導致勞動負荷較大，最終導致效率較低。一般篩選木聚糖酶產酶活性菌株的過程分為初篩、第一次復篩、第二次復篩……第n次復篩，等等。采用透明圈法應用于初篩、第一次復篩尤其顯得過于精細，導致整個過程工作量過大。另外，在木聚糖酶相關利用工廠內，菌株的保藏一般采用常規的菌株保藏的方法，這樣，非常容易導致菌株的酶活性退化。

發明內容

為了解決現有技術存在的上述問題，本發明的目的是提供一種微生物甄別培養基以及使用所述微生物甄別培養基來簡易快速地培養微生物，本發明更進一步的目的是提供一種篩選木聚糖酶活性目標菌株的方法。該新型的微生物甄別培養基能夠在野外很方便地臨時制備，保持培養基的新鮮度從而適用于采集樣本后立刻進行菌株分離培養，并且能夠高效率篩選目標活性菌株。

在本發明的一個方面，提供了一種微生物甄別培養基，包括胡蘿卜、西紅柿汁以及底物。

優選的，所述胡蘿卜切成片并刻劃連續凹槽；

優選的，所述凹槽為“Z”字型、“S”型、“螺旋”型。

優選的，所述的凹槽的形狀如圖1所示，凹槽的長度D2小于胡蘿卜片的直徑D1，胡蘿卜片的直徑D1為50-70mm，胡蘿卜片的厚度D3為6-10mm。

優選的，所述底物為用檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液分別配制的燕麥木聚糖、樺木木聚糖、阿拉伯木聚糖、木寡糖xylo-oligo 95P等比混合溶液。

本發明的所述微生物甄別培養基按照如下的方法來制備：

(1)將市售胡蘿卜切成片；

(2)在所述的胡蘿卜片上刻劃連續凹槽，

(3)在所述的胡蘿卜片凹槽中傾倒經過無菌過濾器除菌的營養液；

優選的，所述的凹槽不超過胡蘿卜片的邊緣，優選的，凹槽的深度為1～5mm，寬度為0.5～5mm；

進一步優選地，所述的凹槽的深度為3mm，寬度為1mm；優選的營養液的深度為1～2mm。

其中，所述營養液為所述西紅柿汁和所述底物混合而成，所述西紅柿汁和所述底物的體積比為300:1。

其中，將西紅柿經勻漿器研磨至無顆粒狀碎片，過濾取濾液，所述濾液滅菌后即得所述西紅柿汁。

優選的，在過濾時，選用20目篩過濾；且篩孔上覆蓋1～2層衛生紙；

優選的，所述滅菌方法為巴氏滅菌法；

優選的，所述底物中檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液的pH為5.8；