[發明專利]一組用于口腔中幽門螺桿菌的實時熒光定量PCR檢測的特異性引物和探針

在審

• 申請號: 201510460288.5
• 申請日: 2015-07-31
• 公開（公告）號: CN105063191A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: 車團結;徐進章;李亞鵬;李琳;尤崇革;謝小冬;常運朝
• 申請（專利權）人: 蘇州百源基因技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/06;C12N15/11
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 閆艷艷

1.一組用于口腔中幽門螺桿菌的實時熒光定量PCR檢測的特異性引物和探針，其特征在于：所述特異性引物和探針的核苷酸序列為（1）-（3）中的一種：

（1）、上游引物：5'-TGGCGCACGGGTGAGT-3'；

下游引物：5'-CCAATGGCTATCCCAAACTAAGA-3'；

探針：5'-ACGCATAGGTCATGTGC-3'；

所述引物和探針擴增的目標核苷酸序列參見序列表中SEQIDNo.2；

（2）、與（1）所述序列互補的序列；

（3）、將（1）中所述序列向5’端和3’端方向延伸一至數個堿基或刪減一至數個堿基得到的序列。

2.根據權利要求所述的引物和探針，其特征在于：所述探針的5’端熒光報告基團是FAM、TET、JOE、HEX或VIC，3’端標記的是熒光淬滅基團TAMRA、DABCYL或BHQ。

3.口腔中幽門螺桿菌的實時熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1所述的引物和探針。

4.權利要求1或2所述的特異性引物和探針、權利要求3所述的試劑盒在定量檢測口腔中幽門螺桿菌含量中的應用。

5.口腔中幽門螺桿菌的實時熒光定量PCR檢測方法，其特征在于：步驟如下：

（1）制備標準品：將幽門螺桿菌16SrRNA保守基因片段插入到載體pMD18-T中，獲得含有幽門螺桿菌16SrRNA保守基因片段的重組質粒，以此作為標準品；所述幽門螺桿菌16SrRNA保守基因片段參見序列表中SEQIDNo.1的第6-353位核苷酸序列；

（2）標準曲線繪制；

（3）使用權利要求1所述的特異性引物和探針對待測樣品和標準品采用相同的反應體系進行實時熒光PCR擴增；

（4）通過標準曲線和待測樣品的Ct值進行干酪乳桿菌的快速定量檢測。

6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：所述幽門螺桿菌16SrRNA保守基因片段是通過以下引物擴增得到的：

上游引物為5'-TGGCGGCGTGCCTAATACA-3'；

下游引物為5'-GTTGCTGCTTCAGGGTTT-3'。

7.根據權利要求5或6所述的檢測方法，其特征在于：步驟（3）中所述引物和探針的用量均為1.6μl。

8.根據權利要求5或6所述的檢測方法，其特征在于：步驟（3）中所述實時熒光PCR擴增的反應條件為：94℃預變性2分鐘，94℃15秒、60℃40s并收集熒光信號，40個循環。