[發(fā)明專利]基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201510449610.4
• 申請日: 2015-07-28
• 公開（公告）號: CN105018469A
• 公開（公告）日: 2015-11-04
• 發(fā)明（設計）人: 王清水;余彥
• 申請（專利權(quán)）人: 福建師范大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 福州君誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

1.一種基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒，包括淤泥微生物細胞的破碎、雜蛋白的抽除，磁珠法回收微生物基因組，其特征是：

淤泥微生物細胞的破碎：稱取1-2g淤泥樣品于10ml離心管中，加入4-6ml?Buffer?A?溶液，震蕩3-5min混勻，加入溶菌酶至終濃度為3-10mg/ml，震蕩5-10min混勻，37℃，225-300?r/min?搖床上震蕩1-2h，加入600-800?μl?Buffer?B溶液，震蕩5-10min混勻后60-70℃水浴1-2h，期間每10-20min震蕩混勻1-2min；

雜蛋白的抽除：往溶液中加入4-5ml?Buffer?C，振蕩器震蕩30-60s后，12000-13000rpm/min?離心10-20min，將上清移至新的離心管中，加入等體積的Buffer?D，12000-13000rpm/min?離心10-20min，將上清移至新的離心管中；

磁珠法回收微生物基因組：加入等體積的?Buffer?E，震蕩10-20s，室溫放置5-10min，將離心管放在磁力架上，進行磁珠分離，待磁珠吸附到離心管一側(cè)時，吸去液體，保留磁珠，往含有磁珠的離心管中加入1-2ml?Buffer?F,打勻后室溫靜止5-10min，將離心管放在磁力架上，進行磁珠分離，待磁珠吸附到離心管一側(cè)時，吸去液體，保留磁珠，往含有磁珠的離心管中加入50-100μl?Buffer?G，將離心管放在磁力架上，進行磁珠分離，待磁珠吸附到離心管一側(cè)時吸取液體，此溶液即為淤泥微生物基因組DNA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒，其特征是所述的磁珠為硅基生物磁珠，粒徑為1um。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒，其特征是所述的Buffer?A：0.1-0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷，0.1-0.2?mol/L乙二胺四乙酸，0.1-0.2?mol/L磷酸鈉，1.5-2?mol/L氯化鈉，1-2%十六烷基三甲基溴化銨，PH=7.0-9.0。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒，其特征是所述的Buffer?B:?20-30%質(zhì)量體積比的十二烷基硫酸鈉。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒，其特征是所述的Buffer?C:?酚：氯仿：異戊醇的體積體積比為25:24:1。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒，其特征是所述的Buffer?D:?氯仿：異戊醇的體積體積比為24:1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒，其特征是所述的Buffer?E：異丙醇：磁珠混懸液的體積比為24:1，其中磁珠混懸液由磁珠和水按照1:2體積比配置。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒，其特征是所述的Buffer?F：4.3-21.4?mmol/L三羥甲基氨基甲烷,?2.1-4.2?mmol/L乙二胺四乙酸,42.9-85.7?mmol/L?Nacl，60-80%無水乙醇。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法提取淤泥微生物基因組DNA的試劑盒，其特征是所述的Buffer?G：8-10mmol/L?Tris三羥甲基氨基甲烷（Tris），PH=8.0-9.0。