[發明專利]一種葉酸-殼聚糖-表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）納米粒的制備方法在審
| 申請號： | 201510445312.8 | 申請日： | 2015-07-27 |
| 公開（公告）號： | CN104983689A | 公開（公告）日： | 2015-10-21 |
| 發明（設計）人： | 李春陽;付琳 | 申請（專利權）人： | 南京飛馬食品有限公司 |
| 主分類號： | A61K9/14 | 分類號： | A61K9/14;A61K31/353;A61K47/36;A61P3/06;A61P39/06 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 211215 江蘇省南京市溧水區*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 葉酸 聚糖 表沒食 子兒 茶素 沒食子酸酯 egcg 納米 制備 方法 | ||
1.一種葉酸-殼聚糖-表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）納米粒的制備方法?，其特征在于采取如下方法：
A、葉酸活性酯的制備：稱取葉酸（FA）200-300mg，溶于5-10ml無水的二甲基亞砜（DMSO）中，加入二環己基碳二亞胺（DCC）200-300mg和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）100-200mg溶解，過夜后濾去二環己基脲（DCU），濾液經減壓蒸餾除去部分溶劑，攪拌中逐滴將濾液滴入冰冷的含30-40%丙酮的無水乙醚溶液中，得黃色沉淀DCU，濾液經旋轉蒸發、真空冷凍干燥，得到葉酸活性酯；
B、殼聚糖的合成：稱取殼聚糖（CS）100-200mg，溶于30-60ml醋酸-醋酸鈉緩沖液（PH4.6），得到殼聚糖醋酸水溶液，在磁力攪拌下以2-3ml/min的速度緩慢向溶液中加入8-15ml葉酸活性酯的DMSO溶液（20mg/ml），30-40℃反應18-20h，離心，用蒸餾水洗滌沉淀數遍，重新將沉淀溶于2-4%的醋酸水溶液中，得到1-2mg/ml葉酸偶聯殼聚糖溶液；
C、葉酸殼聚糖的分離純化：取適量葉酸偶聯殼聚糖溶液，低速離心后取上清液，用Sephadex?G-25葡聚糖凝膠層析柱進行分離，用2-4%醋酸溶液洗脫，流速1.5ml/min；在363nm波長檢測洗脫，收集流出的第一個吸光峰值，冷凍干燥得葉酸偶聯殼聚糖純品；
D、葉酸偶聯殼聚糖的EGCG溶液制備：將葉酸偶聯殼聚糖溶于1-3%的冰醋酸溶液中，稱取一定量的EGCG加入溶液中，用NaOH溶液調節pH3-5，制成EGCG含量為0.5-1mg/ml的葉酸偶聯殼聚糖溶液；
E、納米顆粒的制備：取一定量TPP用純水溶解，保持葉酸偶聯殼聚糖與TPP比例在4-6：1之間，將TPP溶液和葉酸偶聯殼聚糖EGCG溶液分別過0.45μm的濾膜，向勻速攪拌的葉酸偶聯殼聚糖的EGCG溶液逐滴加入TPP溶液，得負載EGCG的葉酸殼聚糖納米微球。
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