[發(fā)明專(zhuān)利]一種葉酸-殼聚糖-表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）納米粒的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510445312.8
• 申請(qǐng)日: 2015-07-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104983689A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李春陽(yáng);付琳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京飛馬食品有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K9/14
• 分類(lèi)號(hào): A61K9/14;A61K31/353;A61K47/36;A61P3/06;A61P39/06
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

一、技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明為一種葉酸-殼聚糖-表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）納米粒的制備方法?，屬于食品生物技術(shù)領(lǐng)域。

二、背景技術(shù)

?????表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）是一種多酚類(lèi)物質(zhì)，具有降血脂、抗氧化、清除體內(nèi)自由基等特殊生理功能功效。但由于EGCG不穩(wěn)定，易受外界環(huán)境變化而降解或生成副產(chǎn)物，限制了其在各領(lǐng)域的應(yīng)用。

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)葉酸偶聯(lián)殼聚糖包埋EGCG的研究較少，利用葉酸的靶向性，使葉酸偶聯(lián)殼聚糖，利用離子凝膠法制備得到葉酸-殼聚糖-EGCG納米微球，增加EGCG的穩(wěn)定性，提高EGCG的生物利用率。

????在人類(lèi)疾病發(fā)展史上，全球范圍內(nèi)，惡性腫瘤已成為嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的主要疾病。目前的主要治療方法藥物選擇性低，既殺傷腫瘤細(xì)胞，同時(shí)也會(huì)損害體內(nèi)某些正常細(xì)胞，因而在治療中常出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，影響療效。所以，將靶向制劑用于腫瘤化療具有明顯的優(yōu)勢(shì)，且勢(shì)在必行。

三、發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問(wèn)題??本發(fā)明主要針對(duì)惡性腫瘤的防治，制備新型分子靶向藥物和傳遞藥物載體的鏈接。

技術(shù)方案??本發(fā)明提供了一種葉酸-殼聚糖-表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸（EGCG）納米粒的制備方法，具體內(nèi)容如下：

A、葉酸活性酯的制備：稱(chēng)取FA200-300mg，溶于5-10ml無(wú)水的DMSO中，加入DCC200-300mg和NHS100-200mg溶解，過(guò)夜后濾去DCU，濾液經(jīng)減壓蒸餾除去部分溶劑，攪拌中逐滴將濾液滴入冰冷的含30-40%丙酮的無(wú)水乙醚溶液中，得黃色沉淀DCU，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、真空冷凍干燥，得到葉酸活性酯；

B、殼聚糖的合成：稱(chēng)取CS100-200mg，溶于30-60ml醋酸-醋酸鈉緩沖液（PH4.6），得到殼聚糖醋酸水溶液，在磁力攪拌下以2-3ml/min的速度緩慢向溶液中加入8-15ml葉酸活性酯的DMSO溶液（20mg/ml），30℃反應(yīng)18-20h，離心，用蒸餾水洗滌沉淀數(shù)遍，重新將沉淀溶于2-4%的醋酸水溶液中，得到1-2mg/ml葉酸偶聯(lián)殼聚糖溶液；

C、葉酸殼聚糖的分離純化：取適量葉酸偶聯(lián)殼聚糖溶液，低速離心后取上清液，用Sephadex?G-25葡聚糖凝膠層析柱進(jìn)行分離，用2-4%醋酸溶液洗脫，流速1.5ml/min。在363nm波長(zhǎng)檢測(cè)洗脫，收集流出的第一個(gè)吸光峰值，冷凍干燥得葉酸偶聯(lián)殼聚糖純品；

D、葉酸偶聯(lián)殼聚糖的EGCG溶液制備：將葉酸偶聯(lián)殼聚糖溶于1-3%的冰醋酸溶液中，稱(chēng)取一定量的EGCG加入溶液中，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值，制成EGCG含量為0.5-1mg/ml的葉酸偶聯(lián)殼聚糖溶液；

E、納米顆粒的制備：取一定量TPP用純水溶解，保持葉酸偶聯(lián)殼聚糖與TPP比例在4-6：1之間，將TPP溶液和葉酸偶聯(lián)殼聚糖的EGCG溶液分別過(guò)0.45μm的濾膜，向勻速攪拌的葉酸偶聯(lián)殼聚糖的EGCG溶液逐滴加入TPP溶液，得到載EGCG的葉酸殼聚糖納米微球。

本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)和積極效果如下：??????

???1、利用葉酸的靶向性，使葉酸偶聯(lián)殼聚糖。

???2、利用離子凝膠法制備得到葉酸-殼聚糖-EGCG納米微球，增加EGCG的穩(wěn)定性，提高EGCG的生物利用率。

四、具體實(shí)施方式

實(shí)施例1???????????????