[發明專利]一株組成型表達基因工程菌及其生產L-丙氨酸的應用

在審

• 申請號: 201510443373.0
• 申請日: 2015-07-27
• 公開（公告）號: CN105018405A
• 公開（公告）日: 2015-11-04
• 發明（設計）人: 程池;徐友強;裴疆森;張奇;馬玉岳;姜增妍
• 申請（專利權）人: 中國食品發酵工業研究院;煙臺恒源生物股份有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P13/06;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一株大腸埃希氏菌（Escherichia?coli）基因工程菌Escherichia?coli?CICC?11032S，其含有外源L-天冬氨酸-β-脫羧酶基因（asd），優選所述asd基因來源于睪丸酮叢毛單胞菌（Comamonas?testosteroni）或者其他能夠表達相同功能酶的微生物，優選所述asd是以睪丸酮叢毛單胞菌基因組DNA為模板，通過PCR擴增獲得，進一步優選所述asd的序列如SEQ?ID?NO.?1所示。

2.如權利要求1所述基因工程菌，其特征在于所述菌株能夠組成型表達所述asd基因，優選所述菌株含有組成型表達L-天冬氨酸-β-脫羧酶基因的表達載體，進一步優選所述表達載體，其特征在于pETPp-asd含有tac和T7共2個啟動子，啟動子后均含有asd基因，且不含有阻遏基因lacI。

3.權利要求1?-?2任一項所述基因工程菌在生產L-丙氨酸中的用途。

4.如權利要求3所述用途，包括以下步驟：

使用權利要求1?-?2任一項所述的基因工程菌處理富馬酸，得L-丙氨酸；

進一步優選包括如下步驟：

(1)?將權利要求1?-?2任一項所述的基因工程菌活化，獲得種子液；

(2)?將上述種子液接入發酵培養基，發酵，得發酵液；

(3)?離心上述發酵液，收集菌體，懸浮菌體，轉化富馬酸，獲得L-丙氨酸。

5.如權利要求4所述用途，包括以下步驟：

(1)?將權利要求1?-?2任一項所述的基因工程菌斜面菌種接種種子培養基，?30?–?40^oC，50?–?200?rpm培養8?–?16?h，獲得種子液；

(2)?種子液接入發酵培養基，30?–?40^oC，50?–?200?rpm培養10?–?20?h，獲得發酵液；

(3)?發酵液離心，收集菌體，生理鹽水懸浮，轉入pH?7.0?–?9.0，0.8?–?1.2摩爾/升富馬酸溶液的轉化罐中，至菌體濃度10?–?20（OD₆₀₀），控制溫度40?–?50^oC，攪拌轉速30?–?80?rpm，轉化9?–?12?h，獲得L-丙氨酸轉化液。