[發明專利]氟苯尼考快速檢測試劑盒及其制備、使用方法

有效

• 申請號: 201510442955.7
• 申請日: 2015-07-24
• 公開（公告）號: CN105004860A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發明（設計）人: 王曉潔;張帥
• 申請（專利權）人: 煙臺昊清生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 煙臺雙聯專利事務所(普通合伙) 37225
• 代理人: 牟曉丹

技術領域

本發明涉及抗生素檢測技術的改進，具體涉及氟苯尼考快速檢測試劑盒及其制備、使用方法，屬于免疫學領域。

背景技術

氟苯尼考(Florfenico,FF)中文名稱:氟洛芬、氟甲砜霉素，化學名稱:d(+)-蘇-1-對甲基苯基-2-二氯乙酰氨基-3-氟丙醇，是二十世紀八十年代后期由美國Schering-Plough研制成功的一種獸類專用氯霉素類的廣譜抗菌藥，是第三代氯霉素類抗生素，該藥1990年首次在日本上市，作為新氯霉素的替代品，主要抑制50s亞基的結合從而抑制細菌肽酰基轉氨酶的活性，是新型抗革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌及甲砜霉素耐藥菌的廣譜抗生素，可用于治療豬、牛、禽及水產養殖動物的細菌性疾病。

氯霉素(Chloramphenicol,CAP)作為第一代氯霉素類抗生素，其結構上的-NO2基團與抑制造血功能有關，因此CAP具有脊髓造血功能抑制毒性，可引起可逆性的血細胞減少，引發不可逆再生障礙性貧血的幾率為1:30000。FF用-CH3SO2基團取代了-NO2基團，無潛在再生障礙性貧血危險。同時，FF對耐氯霉素和甲砜霉素(Thiamphenicol,TAP)的耐藥菌株仍有抗菌作用。氟苯尼考作為靶向藥物來發揮生物效應，用藥劑量小，見效快，半衰期延長，血藥濃度高，可長時間維持血藥，廣泛用于動物疾病的預防和控制。2000年我國批準氟苯尼考為國家二類新獸藥，在水產養殖上可用于治療鰻鱺愛德華氏病和赤鰭病。

在動物體內FF代謝較快，主要代謝產物為氟苯尼考草氨酸、氟苯尼考胺(Florenicol?amine,FFA)、氟苯尼考醇等，但是FFA是大部分可食動物組織中最主要的代謝產物，因此FFA被作為休藥期計算的標志殘留物。雖然郭桂芳等認為FF注射液無明顯的急性毒性和亞慢性毒性，但是有研究表明高劑量的FF可以小鼠胸腺、脾臟的重量降低，國外的研究也表明FF可以抑制小鼠的體液免疫和細胞免疫，這郭桂芳得出的結論相互印證，表明FF具有較強的免疫毒性。FF在養殖業中的大量應用會導其在動物性食品中的殘留，為了保障公眾健康，我國對動物組織中氟苯尼考的最大殘留量做了規定，要求的肌肉殘留限量為200μg/Kg、肝臟殘留限量為3000μg/Kg、腎臟殘留限量為300μg/Kg。

發明內容

本發明針對氟苯尼考殘留的現狀，以及其對人體的危害，設計發明提供一種能夠快速、簡便、準確、現場檢測氟苯尼考和其代謝產物氟苯尼考胺的檢測試劑盒及其制備、使用方法。

本發明的技術方案實現如下

氟苯尼考快速檢測試劑盒，其特殊之處在于包括自下而上排列的支撐體5、用于快速吸收檢測試劑的吸水層3、由硝酸纖維素膜制成的檢測層2、帶通孔1的蓋板4；保藏號為：CCTCC—C201575雜交瘤細胞FFA-C所分泌的、膠體金標記的抗氟苯尼考胺單克隆抗體C(簡稱：金標單抗C)；A液：含1-5％PEG20000、0.05-0.25％吐溫-20的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)；B液：含0.01-0.25％吐溫-20的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)；

所述金標單抗C是由堿水解法制備氟苯尼考胺(FFA)半抗原與牛血清白蛋白(BSA)通過戊二醛法偶聯合成氟苯尼考胺-牛血清白蛋白(FFA-BSA)完全抗原，將其作為免疫原而制備的抗氟苯尼考胺單克隆抗體，經膠體金標記后而致；

所述的膠體金標記的單克隆抗體C的制備步驟如下：

1、以公知的膠體金的制備工藝制備膠體金溶液，制得的膠體金的顆粒大小為10-20nm；

2、將單克隆抗體C(0.5-1g/L抗體蛋白)，按150-500μl加入到上述的100ml膠體金溶液中，慢攪混勻；

3、向混合溶液中加入PEG20000，使其終濃度為1-5％，靜置過夜；

4、將其離心8000-10000轉/分，1-1.5小時，棄上清；

5、取離心沉淀，用含有1-5％PEG20000、0.05-0.25％吐溫-20、0.02％疊氮化鈉的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液懸起，制成金標單抗C；

所述磷酸鹽緩沖液的PH值為7.4，其中含有KCI?0.2g、NaCI?8.0g、KH₂PO₄0.2g、Na₂HPO₄12H₂O?2.9g、蒸餾水1000ml；

所述步驟2中單克隆抗體C與膠體金溶液慢攪混勻30-60min。

氟苯尼考快速檢測試劑盒的使用方法，其特殊之處在于包括以下步驟：