[發明專利]氟苯尼考快速檢測試劑盒及其制備、使用方法

有效

• 申請號: 201510442955.7
• 申請日: 2015-07-24
• 公開（公告）號: CN105004860A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發明（設計）人: 王曉潔;張帥
• 申請（專利權）人: 煙臺昊清生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 煙臺雙聯專利事務所(普通合伙) 37225
• 代理人: 牟曉丹

1.氟苯尼考快速檢測試劑盒，其特殊之處在于包括自下而上排列的支撐體、用于快速吸收檢測試劑的吸水層(3)、由硝酸纖維素膜制成的檢測層(2)、帶通孔(1)的蓋板(4)，保藏號為：CCTCC—C201575雜交瘤細胞FFA-C所分泌的、膠體金標記的抗氟苯尼考胺單克隆抗體C(簡稱：金標單抗C)；A液：含1-5％分子量為20000的聚乙二醇(PEG20000)、0.05-0.25％吐溫-20的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)；B液：含0.01-0.25％吐溫-20的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液。

2.根據權利要求1所述氟苯尼考快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的金標單抗C：是由堿水解法制備氟苯尼考胺(FFA)半抗原與牛血清白蛋白(BSA)通過戊二醛法偶聯合成的氟苯尼考胺-牛血清白蛋白(FFA-BSA)完全抗原，將其作為免疫原而制備的抗氟苯尼考胺單克隆抗體，經膠體金標記后而致。

3.根據權利要求1所述氟苯尼考快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的金標單抗C，其制備方法如下：

(1)、制備膠體金溶液，制得的膠體金的顆粒大小為10-20nm；

(2)、將單克隆抗體C(0.5-1g/L抗體蛋白)，按150-500μl加入到上述的100ml膠體金溶液中，慢攪混勻；

(3)、向混合溶液中加入PEG20000，使其終濃度為1-5％，靜置過夜；

(4)、離心8000-10000轉/分，1-1.5小時，棄上清；

(5)、取離心沉淀，用含有1-5％PEG20000、0.05-0.25％吐溫-20、0.02％疊氮化鈉的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液懸起，制成金標單抗C。

4.按照權利要求3所述的氟苯尼考快速檢測試劑盒，其特征在于步驟(1)中所述膠體金溶液的制備方法為按一定的配比將氯金酸與檸檬酸三鈉混合并加熱制備成膠體金溶液。

5.按照權利要求3所述的氟苯尼考快速檢測試劑盒，其特征在于步驟2)中單克隆抗體C與膠體金溶液慢攪混勻30-60min。

6.氟苯尼考快速檢測試劑盒的使用方法，其特征在于包括以下步驟：將待測樣品滴加到硝酸纖維素膜上，晾干，然后加A液滲入，加金標單抗C滲入，加B?液滲入，5-10分鐘，便可在硝酸纖維素膜上顯示檢測結果。

7.按照權利要求6所述的氟苯尼考快速檢測試劑盒的使用方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)取待測溶液5μl，點在蓋板4的通孔1中的硝酸纖維素膜上，晾干；

(2)在其上加含1-5％PEG20000、0.05-0.25％吐溫-20的0.01mol/LPBS的A液100μl滲入，進行封閉；

(3)加入100μl金標單抗C，滲入；

(4)加入含0.01-0.25％吐溫-20的0.01mol/LPBS的B液100μl滲入；

(5)結果顯示：硝酸纖維素膜上出現紅色斑點為陽性，表示檢測到有氟苯尼考或者氟苯尼考胺殘留，無紅色斑點為陰性，表示檢測不到氟苯尼考或者氟苯尼考胺，或者是兩者濃度低于10ug/ml。