[發(fā)明專利]快速診斷試紙條

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510439727.4
• 申請日: 2015-07-23
• 公開（公告）號: CN105021595B
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發(fā)明（設計）人: 朱成鋼;賈亮
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州金溪生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N21/64;G01N33/558;G01N33/544
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發(fā)明涉及一種快速診斷試紙條。

背景技術

均相化學發(fā)光(Amplified Luminscent Proximity Homogeneous Assay,AlphaLISA)是一種新型的免疫檢測技術。均相化學發(fā)光技術整個過程中不需要洗滌，操作非常簡單，靈敏度高。并且，均相化學發(fā)光動態(tài)范圍寬(3-5個數(shù)量級)，親和范圍大(高低親和力的抗體均可應用)，抗干擾能力強，易于實現(xiàn)自動化。已廣泛用于藥物篩選，其檢測原理如圖1所示。在均相條件下將帶有染料的供體微球、包被有活性分子且?guī)в邪l(fā)光化合物的受體微球以及檢測樣本混合。此時供體微球和包被有活性分子的受體微球可迅速有效地捕捉靶分子而形成免疫夾心復合物。在680nm的激發(fā)光照射下，供體微球中的光敏物質(zhì)受到激發(fā)并催化周圍的氧分子形成高能態(tài)的單線態(tài)氧，該高能態(tài)的單線態(tài)氧擴散至受體微球，產(chǎn)生一系列的化學發(fā)光反應，最后將能量傳遞給銪，發(fā)射出波長為615nm的信號。由于單線態(tài)氧在溶液中維持活性的時間很短(約4us)，只能擴散約200nm的距離，因此只有那些通過待測物質(zhì)連接在一起的受體微球和供體微球才能產(chǎn)生信號，當生物分子不存在特異的相互作用時，單線態(tài)氧無法擴散到受體微球，則不會產(chǎn)生信號。由于均相化學發(fā)光技術具有以上特點，已主要被應用到藥物的大規(guī)模篩選方面。

膠體金免疫層析技術的原理是以硝酸纖維素膜為固相載體，以膠體金作為示蹤標記物，與抗體結(jié)合，在微孔膜的滲濾作用或毛細管作用下，利用抗體反應的高度特異性和膠體金特有的顏色對金標抗體與二抗的結(jié)合進行示蹤，顯示肉眼可見的紅色條帶或斑點，從而實現(xiàn)對待測物的定性或定量分析。膠體金是由氯金酸在檸檬酸三鈉、白磷或其他還原劑的作用下，聚合成大小不同的金顆粒，金顆粒之間是依賴于靜電作用，因而呈現(xiàn)一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故而稱為膠體金。因為膠體金顏色比較明顯，肉眼即可辨別，因此無需任何儀器；檢測速度快，只需要10分鐘左右；產(chǎn)品為干式，沒有液體，運輸和保存方便；操作簡單等特點。膠體金免疫層析試紙條得到了廣泛應用。根據(jù)膠體金標記目標物的不同分為夾心法、間接法和競爭抑制法。夾心法和間接法主要針對大分子待測物，而對于小分子待測物因其分子量比較小，空間結(jié)構(gòu)簡單，一般采用競爭抑制法。但是，膠體金試紙條具有靈敏度偏低，容易產(chǎn)生假陽性等缺點，很多需要高靈敏度檢測的物質(zhì)使用膠體金試紙條的方法達不到要求。因此，膠體金免疫層析試紙條的檢測方法還不能滿足很多臨床檢測的需要，急需進行改進。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種快速診斷試紙條，該診斷試紙條具有特異性強、靈敏度高、快捷、簡便、可定量，適合快速診斷等優(yōu)點。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種快速診斷試紙條，包括PVC底板、樣品墊、玻璃纖維墊、包被C線(即，控制線)以及T線(即，測試線)的硝酸纖維素膜、吸水墊；

在PVC底板的上表面固定設置硝酸纖維素膜，在硝酸纖維素膜的兩側(cè)分別設有玻璃纖維墊和吸水墊；除玻璃纖維墊的右端下表面與硝酸纖維素膜的左端上表面固定相連之外，玻璃纖維墊的其余下表面與PVC底板的上表面固定相連；除吸水墊的左端下表面與硝酸纖維素膜的右端上表面固定相連之外，吸水墊的其余下表面與PVC底板的上表面固定相連；在玻璃纖維墊的左側(cè)還設有樣品墊，除樣品墊的右端下表面與玻璃纖維墊的左端上表面固定相連之外，樣品墊的其余下表面與PVC底板的上表面固定相連。

作為本發(fā)明的基于均相化學發(fā)光技術的快速診斷試紙條的改進：

玻璃纖維墊中包被有偶聯(lián)了特異性抗體Ⅰ的受體微球；

該玻璃纖維墊的制備方法為：

將偶聯(lián)了特異性抗體Ⅰ的受體微球用釋放緩沖液稀釋至濃度為80～100ug/ml，噴至玻璃纖維墊上，用量為：1～5ul/cm；

備注說明：噴好后37℃烘干4小時；

所述釋放緩沖液為：在100ml的10～100mmol/L、pH 7.4的磷酸鹽緩沖液或硼酸鹽緩沖液中，加入10～40g蔗糖、3～10g海藻糖、0.5～1g的N，O-雙三甲硅基乙酰胺、0.2～0.5g慶大霉素；

硝酸纖維素膜(簡稱為NC膜)的制備方法為：

將偶聯(lián)了特異性抗體Ⅱ的供體微球用分析緩沖液稀釋至濃度為200～300ug/ml，然后噴至硝酸纖維素膜的T線位置；用量為：1～1.5ul/cm；

將偶聯(lián)了能與所述特異性抗體Ⅰ相結(jié)合的特異性抗體Ⅲ的供體微球用分析緩沖液稀釋至濃度為200～300ug/ml，然后噴至硝酸纖維素膜的C線位置；用量為：1～1.5ul/cm；