[發(fā)明專利]一種植物復(fù)合免疫制品生產(chǎn)工藝

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510439088.1
• 申請(qǐng)日: 2015-07-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105145637A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-12-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李素影
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 李素影
• 主分類號(hào): A01N63/02
• 分類號(hào): A01N63/02;A01P21/00;A01P3/00;C12N7/00;C12N7/08
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于一種植物復(fù)合免疫制品的生產(chǎn)工藝，具體地說(shuō)是一種具有全面提高植物免疫功能抑制植物病害發(fā)生的復(fù)合免疫制品的生產(chǎn)工藝。

背景技術(shù)

植物和人以及動(dòng)物一樣，其本身通過(guò)應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)疾病具有免疫功能。為適應(yīng)當(dāng)前保護(hù)生態(tài)環(huán)境的需要，進(jìn)而保護(hù)人類身體健康，一些國(guó)家和地區(qū)開(kāi)始采取化學(xué)誘抗的方法來(lái)增強(qiáng)植物的免疫功能以達(dá)到植物防病治病的目的，但效果非但不明顯，而且仍然存在著化學(xué)污染的問(wèn)題。也有一些國(guó)家在進(jìn)行植物疫苗研究，并開(kāi)始進(jìn)行試驗(yàn)性應(yīng)用，但這些植物疫苗一般都是單獨(dú)疫苗，只對(duì)一種病害有一定的防治和治療作用，且采取的是傳統(tǒng)動(dòng)物免疫制劑的制取方法進(jìn)行制取的，一次制取的數(shù)量有限，成本較高，不僅不能從根本上解決農(nóng)藥污染問(wèn)題，而且因制取方法的限制，無(wú)法大量滿足市場(chǎng)的需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的，在于提供一種快速高效且能工廠化大規(guī)模生產(chǎn)的植物復(fù)合免疫制品生產(chǎn)工藝。

本發(fā)明采取以下技術(shù)方案，一種植物復(fù)合免疫制品生產(chǎn)工藝，步驟如下：

第一步，收集病毒源，預(yù)先在田間采集該種發(fā)病植物上的病菌或病毒，進(jìn)行分離提純；

第二步，建立植物病專用毒園，接種上述病菌或病毒到專用植物病毒園中，讓該種植物大量感染病菌和病毒；

第三步，在病毒園植物發(fā)病進(jìn)入高發(fā)期，采收病變組織，用100—200目普通粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，送入發(fā)酵池，攪拌均勻，進(jìn)行發(fā)酵減毒。在發(fā)酵過(guò)程中，發(fā)酵溫度要達(dá)到36℃以上，時(shí)間為5—7天。

第四步，待發(fā)酵完成后，送入150—250目分離機(jī)加入等量的水進(jìn)行分離；為提高利用率，分離后的殘?jiān)^續(xù)加入同等量的水繼續(xù)攪拌，進(jìn)行第二次分離；把兩次分離出來(lái)的含有病菌或病毒的混合液體通過(guò)中空纖維系統(tǒng)濃縮到原濃度的三分之一后裝入商品瓶中，即成為植物復(fù)合免疫制品。

進(jìn)一步，裝瓶后的病毒疫苗可進(jìn)行二次紫外線滅毒，制成植物復(fù)合免疫制品。

進(jìn)一步，第一步中的提純方法為：

采集的病毒源組織在搗碎機(jī)搗碎，加入緩沖液（1∶2W/V）中，再加入0.01mol銅試劑和0.5％巰基乙醇，勻漿3-5分鐘；再加冷卻氯仿（1∶1W/V），變速研磨1分鐘；初步離心，4℃靜置15分鐘，留上層水相，得初提液；

初提液中加4％聚乙二醇和0.25mol氯化鈉，攪拌1小時(shí)；離心10000g，4℃溫度下30分鐘，留沉淀；用1ml/100ml緩沖液緩沖液再懸浮沉淀，攪拌2小時(shí)；離心3000g，4℃靜置10分鐘，留上清液；再離心10000g，4℃靜置30分鐘，留沉淀；再用濃度為1ml/100ml緩沖液懸浮，制成再提液；

最后離心3000g，4℃靜置10分鐘，留上清液，即為提純后的病毒懸浮液，4℃保存。

本發(fā)明適合果樹、蔬菜、糧食作物、林木、花卉等所有植物品種的復(fù)合免疫制品的生產(chǎn)。

本發(fā)明尤其適用于葡萄中的白腐病、黑痘病、霜霉病、或炭疽病的復(fù)合免疫制品生產(chǎn)。

本發(fā)明，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本較低，不僅可以制取多種植物的免疫復(fù)合制劑，而且可以工業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)，生產(chǎn)量大，可以快速滿足市場(chǎng)的需求，由于該復(fù)合免疫制品含有大量的減毒或滅度病菌病毒和大量的植物血清，不僅可以增強(qiáng)植物的免疫功能，而且對(duì)發(fā)病植物具有一定的治療作用，對(duì)改善生態(tài)環(huán)境、保障農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全和保護(hù)人類健康具有非常重要的作用。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

以制作葡萄復(fù)合免疫制品為例

第一步，采集病毒源，采集葡萄上的發(fā)病病菌，白腐病、黑痘病、霜霉病或炭疽病，用上述技術(shù)方案所述的病毒提純方法進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆蛛x提純，得到一種復(fù)合性病毒源。采集的病毒源組織在搗碎機(jī)搗碎，加入緩沖液（1∶2W/V）中，再加入0.01mol銅試劑和0.5％巰基乙醇，勻漿3-5分鐘；再加冷卻氯仿（1∶1W/V），變速研磨1分鐘；初步離心，4℃靜置15分鐘，留上層水相，得初提液；初提液中加4％聚乙二醇和0.25mol氯化鈉，攪拌1小時(shí)；離心10000g，4℃溫度下30分鐘，留沉淀；用1ml/100ml緩沖液緩沖液再懸浮沉淀，攪拌2小時(shí)；離心3000g，4℃靜置10分鐘，留上清液；再離心10000g，4℃靜置30分鐘，留沉淀；再用濃度為1ml/100ml緩沖液懸浮，制成再提液；最后離心3000g，4℃靜置10分鐘，留上清液，即為提純后的病毒懸浮液，4℃保存。