[發明專利]從廢白陶土中提取β?谷甾醇的方法及薄層層析檢測方法

有效

• 申請號: 201510438711.1
• 申請日: 2015-07-23
• 公開（公告）號: CN104974211B
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 高文芳;劉代成
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00;G01N30/90
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司37221
• 代理人: 張勇

技術領域

本發明涉及一種從油脂加工廢白陶土中提取β-谷甾醇的方法及薄層層析檢測方法。

背景技術

甾醇是一種甾族化合物，包括植物甾醇、動物甾醇和菌類甾醇三大類。其中植物甾醇是一種天然活性物質，廣泛存在于自然界的植物中。天然的植物甾醇主要包括β-谷甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇和菜油甾醇四種，其中玉米油中以β-谷甾醇含量最大。

大量試驗結果顯示，β-谷甾醇等植物甾醇具有重要的生理活性：①能有效降低血清中膽甾醇(無論是游離型還是酯型)水平，起到預防和治療高血壓、冠心病等心血管疾病的作用；②能促進產生血纖維蛋白溶酶原激活因子，可作為血纖維溶解觸發素，起到預防血栓癥的作用；③具有抗炎作用；④具有類似乙酰水楊酸(阿斯匹林)的退熱效果；⑤具有阻斷致癌物誘發癌細胞形成的功能，抗癌效果顯著；⑥分子結構使其具有較強的皮膚滲透性，促進皮脂分泌和溫和保持水分，維持潤濕、柔軟的生理活性和表面活性。

β-谷甾醇等植物甾醇在醫藥領域、化妝品工業、飼料工業、食品中應用廣泛。在日本，已出現含60％的β-谷甾醇和生育酚混合的藥品，作為降低血清膽固醇的商品出售。由谷甾醇摻入其他藥物成分制成的復方谷甾醇片，有很好的降血清膽固醇及降血脂作用，能防止動脈粥樣硬化的發展，對高血脂癥、冠狀動脈硬化性心臟病、胸悶、心悸等均有治療作用。另外，谷甾醇軟膏在治療宮頸癌、皮膚癌方面顯示出一定的優越性。

廢白陶土作為油脂加工過程中產生的一種下腳料，目前對于其研究較少，多作為廢棄物直接丟棄。如果能從中提取分離出β-谷甾醇，并對其開發利用，其經濟效益、社會效益會十分顯著，具有廣闊的開發前景。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種從油脂加工廢白陶土中提取β-谷甾醇的方法及薄層層析檢測方法。

為實現上述目的，本發明采用下述技術方案：

一種從廢白陶土中提取β-谷甾醇的方法，步驟如下：

(1)將油脂加工工藝中使用后的廢白陶土采用丙酮進行提取，過濾，蒸除丙酮，得油狀物；

(2)將步驟(1)的油狀物用5％(體積百分數)的濃硫酸-乙醇溶液進行水浴加熱，回流提取，蒸除溶劑，再加入80％(體積百分數)的乙醇溶液、氫氧化鈉，加熱回流皂化，向皂化后的液體中加入去離子水、石油醚，震蕩萃取，分層后取石油醚層，重復萃取，合并萃取液，并用去離子水洗滌至中性，蒸除石油醚，即得β-谷甾醇提取物。

步驟(1)中，丙酮的加入量為廢白陶土的2-4倍質量體積(即每克廢白陶土中加入丙酮的量為2-4mL)；優選的，丙酮的加入量為廢白陶土的3倍質量體積。

步驟(1)中，加入丙酮進行提取的次數為3次。

步驟(2)中，濃硫酸-乙醇溶液的加入量與油狀物的比為(8-12)mL:1g，優選為10mL:1g；乙醇溶液的加入量與油狀物的比為(3-8)mL:1g，優選為5mL:1g；氫氧化鈉的加入量與油狀物的質量比為5：(16-17)。

步驟(2)中，加入濃硫酸-乙醇溶液進行水浴加熱的溫度為80℃，回流提取的時間為6小時。

步驟(2)中，加熱回流皂化的溫度為80℃，時間為2小時。加熱回流皂化的溫度和時間對皂化的效果都會產生影響，皂化溫度過高會使目標物質分解，皂化溫度過低，會延長皂化的時間，采用本發明的皂化溫度和皂化時間，皂化效果最為理想。

步驟(2)中，震蕩萃取時，去離子水和石油醚的加入量均與皂化后的液體體積相同。

本發明還提供了一種β-谷甾醇的薄層層析掃描檢測方法，步驟如下：

(1)將β-谷甾醇提取物用無水乙醇溶解，制成樣品液，將β-谷甾醇標準品用無水乙醇溶解，制成標準液；

(2)將不同質量的β-谷甾醇標準液和樣品液分別點于同一塊高效薄層硅膠板GF₂₅₄上，加入展開劑，預平衡，后將硅膠板放入展開缸，上行展開，展距達到8㎝時取出晾干，隨后染色液沖洗染色，烘干顯色；

(3)薄層掃描儀進行薄層掃描，得到β-谷甾醇R_f(比移值)和峰面積積分值；由薄層色譜儀管理軟件winCATS 1.4.1得出β-谷甾醇標準液質量和峰面積積分值關系，根據樣品液的峰面積積分值計算出樣品液β-谷甾醇的質量。

步驟(2)中，不同質量的β-谷甾醇標準液為6種質量梯度，分別為50ng,100ng,150ng，300ng，350ng，400ng。